非標記抗體免疫酶組織化學實驗——雙PAP法
實驗方法原理在 PAP 法的基礎上重復第二抗體和 PAP 復合物，重復的連接抗體和 PAP 復合物可能有以下兩種連接方式（圖 4-10）。第一種（A）重復連接抗體可與一個 PAP 中的抗 HRP 抗體上未飽和的 Fc 段結合，再與后加的 PAP 復合物相結合；第二種（B）重復連接抗體與特異性一抗分子上未飽和的 Fc 段相結合，第一抗體上結合了更多的橋抗體和 PAP 復合物。正是這兩種連接方式，對抗原有了進一步放大作用，因而提高了 PAP 法的敏感性。但該方法也存在以下缺點：步驟多、費時、非特異性背景加重，因洗滌多而使脫片率提高。實驗材料石蠟切片動物血清試劑、試劑盒蛋白酶特異性一抗橋抗體PAP 復合物PBSDABH2O2BAB儀器、耗材滴管玻片實驗步驟1. 4 μm 石蠟切片 58℃ 烤片 4 h，切片常規脫蠟至水。2. 蛋白酶消化或 AR（組織抗原的暴露或抗原的修復，此步視情況而定）。3. 0.3％ H2O2 處理切片......閱讀全文
非標記抗體免疫酶組織化學實驗——雙－PAP－法
實驗方法原理在 PAP 法的基礎上重復第二抗體和 PAP 復合物，重復的連接抗體和 PAP 復合物可能有以下兩種連接方式（圖 4-10）。第一種（A）重復連接抗體可與一個 PAP 中的抗 HRP 抗體上未飽和的 Fc 段結合，再與后加的 PAP 復合物相結合；第二種（B）重復連接抗體與特異性一抗分子
非標記抗體免疫酶組織化學實驗——PAP－法
實驗方法原理與酶橋法相似，不同的是酶橋法分四步，而 PAP 法分三步。PAP 法將酶橋法的步驟（3）、步驟（4）合二并為一，用 PAP 復合物替代，故稱 PAP 法（圖 4-9）。PAP 復合物中的抗 HRP 抗體和第一抗體必須為同一種屬動物的 IgG，這樣橋抗體才能作為「橋」將 PAP 復合物連接
非標記抗體酶法PAP法
PAP復合物是離體制備的HRP抗HRP復合物，它的制備方法較多，現簡介其中之一。（1）制備抗HRP血清：健康雄性家兔（2．Okg以上），可先于足趾皮下注射滅活的卡介苗（共lOmg），2周后重復1次，刺激機體免疫系統功能，1周后于背部脊柱兩旁皮內多點注射1．Oral乳劑[福氏完全佐劑，含HRP3。3m
非標記抗體免疫酶組織化學實驗——酶橋法
由于在酶標記抗體過程中，酶與抗體的結合可損害部分抗體和酶的活性，從而降低了抗體的效價。另外，血清中的非特異性抗體也可以被酶標記，這些非特異酶標記抗體與組織中相應抗原結合，放大了非特異背景染色。為了避免酶標記抗體法的上述缺點，Sternberger（1969）在酶標抗體法的基礎上，創建了非標記抗體免疫
非標記抗體免疫酶組織化學實驗——ABPAP－法
實驗方法原理ABPAP 法是 PAP 法和 ABC 法的聯合應用，使更多的酶分子結合到抗原-抗體復合物上，目的就是增加方法的敏感性。其原理見圖 4-11。作者應用了 30 余種特異性一抗、鼠源性和兔源性 PAP 復合物以及 ABC 檢測系統，結果 ABPAP 法比單一的 PAP 法要敏感 7～8 倍
免疫酶標技術——雙PAP法
實驗方法原理這種方法可在復合物體系中連接更多的PAP復合物，對抗原可進一步放大，因此靈敏度更為增強，適用于微量抗原的檢測。實驗材料抗體試劑、試劑盒PBSH2O2血清DAB蘇木精儀器、耗材顯微鏡實驗步驟1. ?標本固定后，PBS洗滌；2. ?1 %H2O2（或1 %H2O2甲醇）阻斷內源性過氧化物，室
非標記抗體免疫酶組織化學實驗
實驗方法原理 首先用酶免疫動物制備成效價高、特異性強的抗酶抗體。在特異性抗體與抗酶抗體之間利用第二抗體作「橋梁」，將它們連接起來，再將酶結合在抗酶抗體上，經顯色顯示抗原的定位。其基本流程為：抗原+特異性抗體 → 第二抗體（橋抗）→ 抗 HRP 抗體 → HRP → DAB+H2O2（顯色）。因為橋抗
免疫酶標方法(直接法、間接法、PAP法和雙PAP法)
一、直接法1．標本固定。2．PBS洗滌2×3分鐘。3．1% H2O2（或1% H2O2 甲醇）抑制內源性過氧化物，室溫10～20分鐘。4．正常血清（1:10）孵育，室溫20分鐘。5．滴加酶標記的抗體37℃1小時或4℃過夜。6．PBS洗滌3×3分鐘。7．DAB＋H2O2顯色5～10分鐘，鏡下控制染色結
免疫酶細胞化學技術中的雙PAP法檢測微量抗原
在復合物體系中連接更多的PAP復合物，來進一步放大抗原，從而使靈敏度更為增強，適用于檢測微量抗原。實驗方法：?將固定后的標本用PBS漂洗；2.?于室溫下用1%H2O2或1%H2O2甲醇浸泡涂片10~20min，用來密封內源性過氧化物酶；3.?PBS漂洗2次，每次3min；4.?在室溫下用二抗的正常血
非標記抗體免疫電鏡實驗——經典法
不標記抗體法通過系統的非標記抗體的免疫學反應，對組織中的抗原進行定位檢測。分為用標記物顯示和不同標記物顯示兩種方法。用于（1）抗體觀察（2）免疫學研究。實驗方法原理標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱；化學交聯反應對抗體和酶的活性有
免疫金組織化學染色實驗——雙－PAG－法
實驗方法原理免疫金銀染色方法敏感、簡便、省時、安全可靠，葡萄球菌 A 蛋白（SPA）金標記四步法是在此基礎上發展起來的更為敏感的一種新方法。SPA 和許多哺乳類動物 IgG 具有親和性，且它們之間的連接不會干擾抗原-抗體的結合。簡單的 SPA 金標記二步法后，第三步用抗 SPA 與 SPA 金表面分
非標記抗體免疫電鏡實驗——快速法(瓊脂擴散法)
實驗方法原理標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱；化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響；結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素，通過一系統的非標記抗體的免疫學反應，對組織
酶免疫技術抗體的酶標記方法
用于酶免疫技術的酶須具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室溫下穩定;反應產物易于顯現;能商品化生產。目前酶免疫技術檢測中常用的酶為辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)和堿性磷酸酶(AP),其次還有葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、溶菌酶和蘋果酸脫氫酶等。由于辣根過氧化
關于細胞組織化學染色的檢查過程介紹
1、檢查過程? PAP法抗原、抗體反應及酶標原理與APAAP法完全相同，都屬于免疫組織化學反應，只是所標記的酶不同。PAP法酶化學反應原理與ABC-AP法完全相同，但ABC-AP法為親合免疫組織化學反應。在染色步驟及方法上PAP法和ABC-AP法完全相同。 2、相關疾病 混合性厭氧菌感染，
免疫學實驗細胞組織化學染色介紹
細胞組織化學染色介紹： 免疫細胞組織化學染色是利用已知的抗體與細胞抗原特異性相結合的特性，通過化學反應使標記在抗體上的顯示劑顯示一定的顏色，并借助顯微鏡、熒光顯微鏡或電鏡進行觀察，以達到對組織、細胞結構中化學成分進行定量、定位分析的目的。 細胞組織化學染色正常值： 檢測結果呈陰
臨床化學檢查方法介紹細胞組織化學染色介紹
細胞組織化學染色介紹： 免疫細胞組織化學染色是利用已知的抗體與細胞抗原特異性相結合的特性，通過化學反應使標記在抗體上的顯示劑顯示一定的顏色，并借助顯微鏡、熒光顯微鏡或電鏡進行觀察，以達到對組織、細胞結構中化學成分進行定量、定位分析的目的。細胞組織化學染色正常值： 檢測結果呈陰性。細胞組織化學染色
非標記抗體免疫電鏡實驗
實驗方法原理 標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱；化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響；結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素，通過一系統的非標記抗體的免疫學反應，對組
免疫球蛋白標記技術_酶標記抗體
免疫標記技術是用特定的物質標記抗原或抗體進行的抗原抗體反應。可借助各種儀器觀察結果或進行自動化測定，可在細胞、亞細胞、超微結構及分子水平上，對抗原抗體反應進行定性和定位研究；或應用各種液相和固相免疫分析方法，對液體中的抗原、半抗原或抗體進行定性和定量測定。實驗方法原理酶標記物包括酶標記抗原、酶標記抗
免疫堿性磷酸酶組織化學實驗——APAAP－法
實驗方法原理APAAP 法的原理與 PAP 法類似，都屬于未標記抗體橋聯法，所不同的是用 AKP 取代了 HRP。該方法較 IAP 法敏感性髙，特別是用于標記固定過的組織。APAAP 法的主要優點是非特異性背景染色較淺，因為其不受內源性過氧化物酶的干擾，APAAP 復合物所用的 AKP 是從小牛腸組
酶標記抗體
酶標記物包括酶標記抗原、酶標記抗體和酶標記SPA等。酶標記物質量的好壞直接關系到免疫酶技術的成功與否，因此被稱為關鍵的試劑。酶標記物中最常用的是酶標記抗體，它是將酶與特異性抗體經適當方法連接而成。酶標記抗體的質量主要取決于純度好、活性強及親和力高的酶和抗體，其次要有良好的制備方法。目前，高質量的酶(
SPA－在免疫組化中的應用——PAP－法
SPA 可為多種示蹤物（如熒光素、酶、膠體金、鐵蛋白）所標記，應用較廣泛的為酶標記 SPA 和金標記 SPA 技術。標記 SPA 常用的酶為 HRP，可應用于間接法染色，SPA 在 PAP 法中可代替橋抗體。實驗方法原理SPA 除與標記物結合后用于代替第二抗體外，其本身可作為橋抗體用于 PAP 染色
非標記抗體免疫電鏡實驗技術
（一） 原理標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱；化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響；結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素，通過一系統的非標記抗體的免疫學反應，對組織
非標記抗體免疫電鏡實驗技術
實驗概要本文介紹了非標記抗體免疫電鏡實驗技術的具體操作方法。實驗原理標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱；化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響；結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的
非標記抗體免疫電鏡實驗技術
(一) 原理標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱;化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響;結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素，通過一系統的非標記抗體的免疫學反應，對組織
非標記抗體免疫電鏡實驗技術
實驗概要本文介紹了非標記抗體免疫電鏡實驗技術的具體操作方法。實驗原理標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱；化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響；結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的
雙脫氧法DNA測序實驗——測序酶進行標記測序反應
在基本的雙晩氧測序反應中，寡核苷酸引物退火于單鏈DNA摸板，在4種脫氧核糖核酸三磷酸存在時，引物為DNA聚合酶所延伸。反應混合物中也含有4種雙脫氧核糖核苷三磷酸的其中一種，當它摻入到DNA的生長鏈時，可終止鏈的延伸。實驗材料DNA試劑、試劑盒寡核苷酸引物測序酶終止混合液測序酶緩沖液焦磷酸酶混合液儀器
酶標記抗體HRP標記抗體戊二醛二步法
實驗概要本實驗介紹了酶標記抗體-HRP標記抗體中的戊二醛二步法的操作流程。實驗原理戊二醛為一種雙功能試劑，通過其醛基分別與酶和免疫球蛋白上的氨基共價結合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白結合物。主要試劑1. 0.1M PH6.8磷酸緩沖鹽水(PBS)：取0.2M Na2HPO4 49ml, 0.2M Na
免疫堿性磷酸酶組織化學實驗——間接免疫堿性磷酸酶法
免疫堿性磷酸酶組織化學技術是以堿性磷酸酶（AKP 或 AP）取代 HRP 來顯示結果的免疫酶組織化學技術。最早出現的是間接免疫堿性磷酸酶法（IAP），1983 年 Mason 及 Moir 等建立了堿性磷酸酶抗堿性磷酸酶（APAAP）復合物法。隨后，人們建立了更為敏感的生物素-親和素-堿性磷酸酶復合
酶聯免疫法的檢測方法雙抗體夾心法簡介
在臨床檢驗中，此法適用于檢驗各種蛋白質等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶結合物而建立此法。如抗體的來源為抗血清，包被和酶標用的抗體最好分別取自不同種屬的動物。如應用單克隆抗體，一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的
免疫酶組織化學技術
免疫酶組織化學技術 1．酶標直接法和間接法 Nakane(1966)將辣根過氧化物酶(HRP) 標記在抗體免疫球蛋白分子上，創建了酶標記免疫組化的直接法、間接法和橋法。 2．PAP法 Stemberger(1969)在酶橋法的基礎上，建立了非標記抗體法，先將HRP免