SDSPAGE常見問題分析
1. 配膠緩沖液系統對電泳的影響？ 在SDS－PAGE不連續電泳中，制膠緩沖液使用的是Tris－HCL緩沖系統，濃縮膠是pH6.7，分離膠pH8.9；而電泳緩沖液使用的Tris－甘氨酸緩沖系統。在濃縮膠中，其pH環境呈弱酸性，因此甘氨酸解離很少，其在電場的作用下，泳動效率低；而CL離子卻很高，兩者之間形成導電性較低的區帶，蛋白分子就介于二者之間泳動。由于導電性與電場強度成反比，這一區帶便形成了較高的電壓剃度，壓著蛋白質分子聚集到一起，濃縮為一狹窄的區帶。當樣品進入分離膠后，由于膠中pH的增加，呈堿性，甘氨酸大量解離，泳動速率增加，直接緊隨氯離子之后，同時由于分離膠孔徑的縮小，在電場的作用下，蛋白分子根據其固有的帶電性和分子大小進行分離。 所以，pH對整個反應體系的影響是至關重要的，實驗中在排除其他因素之后仍不能很好解決問題的情況，應首要考慮該因素。 2. 樣品如何處理？ 根據樣品分離目的不同，主要有三......閱讀全文
測序常見問題及其分析
1、PCR 產物測序時出現重疊峰 問題圖1（模板中有堿基缺失，往往是單一位點（1-1）或兩個位點（1-2）堿基缺失導致測序 結果移碼） 解決方法：將PCR 產物克隆到質粒（如T 載體）中挑單克隆測序，或將PCR 產物進行PAGE 純化（至少瓊脂糖充分電泳后切膠純化）后再進
TA克隆常見問題分析
現象可能原因解決方案 轉化后無菌落生長 感受態細胞已經失效用pUC18質粒進行轉化，確認細胞的感受態效率。1ng pUC18質粒至少應得到1000個以上的轉化子。如有問題，重新制備感受態細胞。 平板所用抗性不對pBS-T載體為amp抗性，工作濃度 100 ug/ml 連接中使用了不恰當的vector
QPCR常見問題及其分析
一般來講，進行real-time qPCR MasterMix都是2×的濃縮液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR靈敏度高，所以每個樣品至少要做3個平行孔，以防在后面的數據分析中，由于Ct相差較多或者SD太大，無法進行統計分析。通常來講，反應體系的引物終濃度為10
QPCR常見問題及其分析
一般來講，進行real-time qPCR MasterMix都是2×的濃縮液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR靈敏度高，所以每個樣品至少要做3個平行孔，以防在后面的數據分析中，由于Ct相差較多或者SD太大，無法進行統計分析。通常來講，反應體系的引物終濃
測序常見問題及其分析
1、PCR 產物測序時出現重疊峰問題圖1（模板中有堿基缺失，往往是單一位點（1-1）或兩個位點（1-2）堿基缺失導致測序結果移碼）解決方法：將PCR 產物克隆到質粒（如T 載體）中挑單克隆測序，或將PCR 產物進行PAGE純化（至少瓊脂糖充分電泳后切膠純化）后再進行測序。問題圖2（PCR 產物不純，
QPCR常見問題及其分析
一般來講，進行real-time qPCR MasterMix都是2×的濃縮液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR靈敏度高，所以每個樣品至少要做3個平行孔，以防在后面的數據分析中，由于Ct相差較多或者SD太大，無法進行統計分析。通常來講，反應體系的引物終濃度為100-400
SDSPAGE的影響因素
1. 帶電顆粒的性質凈電荷多少、顆粒大小及形狀。一般凈電荷多，直徑小而且近于球狀，則泳動速度快，反之則慢。?2. 電場強度（電位梯度）指單位長度（cm）支持物體上的電位降，它對泳動度起著十分重要的作用。一般電場強度越高，帶電顆粒移動速度越快。根據電場強度可將電泳分為低壓（常壓）電泳100—500V，
SDSPAGE膠的干燥
凝膠干燥時遇到的主要問題是凝膠的變形和破裂。將凝膠放在Whatman 3MM濾紙上可防止干燥凝膠變形，但凝膠是否破裂取決于凝膠的厚度和干燥器的質量，因此，應盡量使用薄膠并使凝膠干燥器處于良好狀態，使其真空壓力波動極少。(1)試劑與配制：固定液：冰醋酸:甲醇:水（10:20:70）(2)電泳后的凝膠用
SDSPAGE檢測蛋白表達
一、材料與儀器30%丙烯酰胺溶液；1.5mol/L Tris-HCl分離膠緩沖液，PH8.8；1.0mol/L Tris-HCl濃縮膠緩沖液，PH6.8；電泳緩沖液，PH8.3；10%SDS溶液；10%過硫酸銨溶液；樣品處理液；染色液；脫色液；電泳玻璃板，電泳電源架，電泳槽，電泳儀等；蛋白Mark。
SDSPAGE實驗方法
試劑：1. 5x樣品緩沖液（10ml）:0.6ml 1mol/l的Tris-HCl(pH6.8),5ml 50%甘油，2ml 10%的SDS，0.5ml巰基乙醇，1ml 1%溴酚藍，0.9ml蒸餾水。可在4℃保存數周，或在－20℃保存數月。2. 凝膠貯液：在通風櫥中，稱取丙烯酰胺30g，甲叉雙丙烯酰
SDSPAGE的影響因素
1. 帶電顆粒的性質凈電荷多少、顆粒大小及形狀。一般凈電荷多，直徑小而且近于球狀，則泳動速度快，反之則慢。2. 電場強度（電位梯度）指單位長度（cm）支持物體上的電位降，它對泳動度起著十分重要的作用。一般電場強度越高，帶電顆粒移動速度越快。根據電場強度可將電泳分為低壓（常壓）電泳100—500V，電
SDSPAGE的影響因素
1. 帶電顆粒的性質 凈電荷多少、顆粒大小及形狀。一般凈電荷多，直徑小而且近于球狀，則泳動速度快，反之則慢。 2. 電場強度（電位梯度） 指單位長度（cm）支持物體上的電位降，它對泳動度起著十分重要的作用。一般電場強度越高，帶電顆粒移動速度越快。根據電場強度可將電泳分為低壓
Tricine－SDSPAGE實用方案
Tricine-SDS-PAGE是用于分離分子量在1-10kD的肽類用的。一、 試劑配制：1． Low Bis acrylamide（49.5% T, 3% C）Acylamide 48.0gBis 1.5gWater make up to 100ml2. High Bis acrylamide (
SDSPAGE的操作步驟
(1) SDS-PAGE凝膠配制SDS-PAGE凝膠可以參考一些文獻資料進行配制，也可以使用碧云天生產的SDS-PAGE凝膠配制試劑盒(P0012A)。該試劑盒提供了除水和配膠器具外的所有試劑以及配制各種濃度SDS-PAGE的配方。(主要分為濃縮膠和分離膠，配方可自己上網查下)(2) 樣品處理在收集
SDSpage凝膠電泳出現雜帶是什么問題
SDS-PAGE 電泳過程中常見問題以及解決方法 2 Q:SDS-PAGE 電泳的基本原理? A:SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳,是在聚丙烯酰胺凝膠系統中引進 SDS(
SDSpage凝膠電泳出現雜帶是什么問題
SDS-PAGE 電泳過程中常見問題以及解決方法 2 Q:SDS-PAGE 電泳的基本原理? A:SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳,是在聚丙烯酰胺凝膠系統中引進 SDS(
超濾器的常見問題分析
由于超濾器的物質分離功能是依靠“膜”來實現的，所以，它和其他膜分離設備一樣，在使用過程中，總會發生膜污染和通量的遞減。不過，這個問題對于以濾膜篩分為原理的超濾器來說，更為顯著。這種膜污染常發生在三種場合，即濃差極化、大溶質的吸附和吸附層的聚合。?濃差極化超濾器運行時，溶質中分子混合物由靜壓力帶到膜表
水質分析常見問題解析
水質分析又稱水化學分析。即用化學和物理方法測定水中各種化學成分的含量。水質分析過程中常見的問題有哪些呢？?01、BOD緩沖劑液化了還能用嗎??答：BOD緩沖劑時間稍長后會出現液化的現象，這是正常情況，不影響使用。?02、我們測氨氮，是以氮元素計還是以銨根離子計??答:氨氮是指水中以游離氨和銨根離子形
使用涂層測厚儀常見問題分析
使用涂層測厚儀常見問題分析使用涂層測厚儀常見問題分析？涂層測厚儀可無損地測量磁性金屬基體（如鋼、鐵、合金和硬磁性鋼等）上非磁性涂層的厚度（如鋁、鉻、銅、琺瑯、橡膠、油漆等） 及非磁性金屬基體（如銅、鋁、鋅、錫等）上非導電覆層的厚度（如：琺瑯、橡膠、油漆、塑料等）。1.儀器開機沒反應怎么辦？答：首先檢
細胞培養常見問題分析
細胞常見問題分析1、冷凍管應如何解凍？取出冷凍管后，須立即放放37℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化，并注意水面不可以超過冷凍管蓋沿，否則易發生污染情形。另外凍管由液氨桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管之爆裂。2、可否使用與原先培養條件不同之培養基？不能。每一細胞株均有其特定使
PCR常見問題分析與對策
1.PCR產物的電泳檢測時間 一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。?2.假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模板中含有雜蛋白
細胞培養常見問題分析
細胞常見問題分析 1、冷凍管應如何解凍？ 取出冷凍管后，須立即放放37℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化，并注意水面不可以超過冷凍管蓋沿，否則易發生污染情形。另外凍管由液氨桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管之爆裂。 2、可否使用與原先培養條件不同之培養基？
水質分析常見問題解析
水質分析又稱水化學分析。即用化學和物理方法測定水中各種化學成分的含量。水質分析過程中常見的問題有哪些呢？01、BOD緩沖劑液化了還能用嗎?答：BOD緩沖劑時間稍長后會出現液化的現象，這是正常情況，不影響使用。02、我們測氨氮，是以氮元素計還是以銨根離子計?答:氨氮是指水中以游離氨和銨根離子形式存在的
原子熒光常見問題分析
在日常原子熒光光譜分析中，特別是當儀器使用時間長、頻率高時，常會出現一些問題，常見的有：靈敏度突然降低；無熒光信號；空白信號很高；熒光信號不穩定；工作曲線線性差；圖形不正常等情況。有資料[3-4]對這些問題及其解決辦法進行了總結。這些現象的出現通常與以下因素有關： 1．空心陰極燈 由于受到設計和制造
凝膠電泳常見問題分析
要跑瓊脂糖凝膠電泳， 5ng 就能很清楚的跑出來是這樣嗎？能夠照相的清楚的條帶，至少需要多少量呢？參考見解：5ng 已經可以了，但是或許20ng50ng-200ng效果好，在此范圍內呈線性。把210bp的pcr產物進行酶切,得到190+20bp的兩個片段,請問能用瓊脂糖凝膠電泳檢測酶切結果嗎?用多大
凝膠電泳常見問題分析
要跑瓊脂糖凝膠電泳， 5ng 就能很清楚的跑出來是這樣嗎？能夠照相的清楚的條帶，至少需要多少量呢？ 參考見解：5ng 已經可以了，但是或許20ng50ng-200ng效果好，在此范圍內呈線性。 把210bp的pcr產物進行酶切,得到190+20bp的兩個片段,請問能用瓊脂糖凝
蛋白Marker使用常見問題分析
做蛋白表達實驗時，通常用SDS-PAGE電泳檢測目的蛋白的表達情況，MARK是其中非常重要的參照物，使用Mark會遇到以下幾種情況：條帶模糊：電壓過高或電泳時間過長，產熱過多導致電泳緩沖液溫度升高。建議參照Trans產品使用說明書。電泳緩沖液陳舊，建議使用新鮮的電泳緩沖液，為了獲得理想的結果建議在使
凝膠電泳常見問題分析
1、要跑瓊脂糖凝膠電泳，5ng就能很清楚的跑出來，是這樣嗎？能夠照相的清楚的條帶，至少需要多少量呢？ 參考見解 ： 5ng已經可以了，但是或許20ng～200ng效果好，在此范圍內呈線性。 2、把210bp的PCR產物進行酶切，
蛋白提取的常見問題分析
Q：如何進行組織液氮研磨？A：將組織塊在液氮里凍實，敲成大小合適的小塊后放在研缽里，倒液氮，邊研邊加，保持研缽里有液氮，或是保持組織塊不融。研碎了就行了。注意做前研缽等器具要預冷，用液氮或是先放負二十冰箱一段時間。注意事項：1.液氮研磨的研缽，藥勺必須預冷。2.開始研磨前，將研缽置于冰袋上，并加入少
總RNA提取常見問題分析
Q：RNA降解? ?A：1. 新鮮細胞：如果試劑沒有問題，且外源性污染也可以排除，那么降解幾乎都來自裂解液的用量不足。如??果將裂解液直接加入培養皿中裂解細胞，一定要使裂解液能覆蓋住細胞。?2. 新鮮組織：某些富含內源核酸酶的樣品(如肝臟，胸腺等)，即使使用電動勻漿器勻漿也不能避免RNA的降解。更可