釀酒酵母的LiAc／ssDNA／PEG高效轉化法實驗
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 TE 緩沖液雙蒸水儀器、耗材 磁力攪拌器玻璃燒杯實驗步驟 一、單鏈載體 DNA 的制備1. 在 100 ml 滅菌 TE 緩沖液中溶解 200 mg 高分子量 DNA，置于磁力攪拌器上劇烈攪拌 2~3 個小時以混勻。2. 將載體 DNA 溶液分裝成 9 個 10 ml 和 10 個 1 ml 的等份，儲存于 -20℃。3. 在使用前，將 1 ml 的載體 DNA 煮沸 10 分鐘，并于冰水浴中迅速冷卻。二、醋酸鋰的制備1. 在 90 ml 雙蒸水中溶解 10.2 g LiAc。2. 調節終體積到 100 ml，過濾除菌。三、PEG 的制備1. 將 50 g 分子量為 3350 的 PEG 放入 150 ml 的玻璃燒杯中，加入 35 ml 雙蒸去離子水。2. 用磁力攪拌器攪拌至溶解，大約需要 30 分鐘。3. 將液體轉移到 100 ml 的量筒中。4. 用少量雙蒸水洗一下燒杯并加到盛 PEG 的量筒......閱讀全文
釀酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效轉化法實驗
轉化材料的制備 高效轉化法 轉化含有質粒的菌株 快速簡便的轉化法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA
釀酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效轉化法實驗
轉化材料的制備 高效轉化法 轉化含有質粒的菌株 快速簡便的轉化法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA
釀酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效轉化法實驗
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 TE 緩沖液雙蒸水儀器、耗材 磁力攪拌器玻璃燒杯實驗步驟 一、單鏈載體 DNA 的制備1. 在 100 ml 滅菌 TE 緩沖液中溶解 200 mg 高分子量 DNA，置于磁力攪拌器上劇烈攪拌 2~3 個小時以混勻。2. 將載體 DNA 溶液分裝成 9 個 10 ml
釀酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效轉化法實驗_高效轉化法
實驗材料細胞試劑、試劑盒LiAc儀器、耗材YPAD 平板YPAD 液體培養基實驗步驟1. 取 10 μl 細胞在 YPAD 平板上涂布 2 cm2，培養過夜；或者接種 5 ml 的 YPAD 液體培養基，于 30℃ 震蕩培養過夜。2. 將一瓶 YPAD 培養基于 30℃ 平衡過夜。3. 去 50 m
釀酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效轉化法實驗_轉化材料的制備
實驗材料DNA試劑、試劑盒TE 緩沖液雙蒸水儀器、耗材磁力攪拌器玻璃燒杯實驗步驟一、單鏈載體 DNA 的制備1. 在 100 ml 滅菌 TE 緩沖液中溶解 200 mg 高分子量 DNA，置于磁力攪拌器上劇烈攪拌 2~3 個小時以混勻。2. 將載體 DNA 溶液分裝成 9 個 10 ml 和 10
釀酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效轉化法實驗_轉化含有質粒菌株
實驗材料細胞試劑、試劑盒YPAD儀器、耗材培養瓶SC 減樣選擇培養基實驗步驟1. 在一個 250 ml 的培養瓶中，接種該菌株到 25 ml 相應的 SC 減樣選擇培養基中，200 r/min 培養過夜。2. 檢測每毫升細胞數，按 2.5X108?個細胞計算所需培養物體積。3. 將該體積的培養物加到
釀酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效轉化法實驗_快速簡便的轉化法
實驗材料酵母菌試劑、試劑盒LiAc儀器、耗材YPAD 平板YPAD 液體培養基實驗步驟1. 將 10 μl 接種物在 YPAD 平板上涂布 2.0 cm2，培養過夜。2. 對一個轉化來說，在微量離心管中用 1.0 ml 滅菌水懸浮一接種環酵母菌。3. 離心沉淀細胞，將水去掉。4. 用 500 μl
非洲粟酒裂殖酵母的轉化實驗_LiAc轉化法
實驗材料細胞試劑、試劑盒腺嘌呤亮氨酸LiAc儀器、耗材YEA 平板實驗步驟1. 在 YEA 平板上培養細胞直到長成可見單菌落。2. 接種單菌落到添加有 150 mg/L 腺嘌呤、亮氨酸和/或尿嘧啶等營養缺陷互補物的 YEA 或 PM 培養基中，于允許溫度以 200 r/min 振蕩培養防止酵母菌沉積
釀酒酵母的電穿孔轉化法實驗
材料的準備 電穿孔轉化法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 高分子量 DNA 試劑、試劑
釀酒酵母的電穿孔轉化法實驗
材料的準備 電穿孔轉化法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 高分子量 DNA 試劑、試劑
釀酒酵母的電穿孔轉化法實驗_電穿孔轉化法
實驗材料細胞試劑、試劑盒PEG3350儀器、耗材YPAD 液體培養基渦旋振蕩器實驗步驟1. 將菌株接種 100 ml 的 YPAD 液體培養基，30℃ 振蕩培養過夜，使細胞滴度達到每毫升 1X108?到 2X108?個細胞。2. 3000 g 離心 5 分鐘沉淀細胞，用 100 ml 滅菌水洗兩遍，
釀酒酵母的電穿孔轉化法實驗_材料的準備
實驗材料高分子量 DNA試劑、試劑盒TE 緩沖液儀器、耗材微量離心管實驗步驟一、單鏈載體 DNA 的制備1. 在 100 ml TE 緩沖液中溶解 1 g 高分子量 DNA，用磁力攪拌器于 4℃ 攪拌過夜。2. 用大直徑探頭以最大功率超聲處理 30 秒；應將探頭在溶液中持續移動，以保證超聲處理的均一
釀酒酵母的電穿孔轉化法實驗_材料的準備
實驗材料高分子量 DNA試劑、試劑盒TE 緩沖液儀器、耗材微量離心管實驗步驟一、單鏈載體 DNA 的制備1. 在 100 ml TE 緩沖液中溶解 1 g 高分子量 DNA，用磁力攪拌器于 4℃ 攪拌過夜。2. 用大直徑探頭以最大功率超聲處理 30 秒；應將探頭在溶液中持續移動，以保證超聲處理的均一
酵母表達載體的構建與酵母轉化
實驗概要本實驗介紹了酵母表達載體的構建、酵母轉化方法及酵母抗逆實驗。主要試劑試劑配制：1 .1 M Tris.Cl(pH 7.5)(100 ml)：12.1g Tris堿，加80 ml ddH2O，濃HCl調pH 7.5，定容至100 ml；2. 0.5 M EDTA(pH 8.0) (100 ml
酵母的高效轉化
酵母的高效轉化1．接種5ml液體YPAD或10ml SC，30℃下振蕩培養過夜。2．計數過夜培養物細胞密度，以最終5×106個/ml的細胞密度接種50ml YPAD培養液。3．置30℃，200r/min振蕩培養至2×107個細胞/ml，通常需要3～5小時，該培養物的細胞足夠供十次轉化用。4．用50m
釀酒酵母培養條件實驗
實驗材料 YPAD 過夜培養物儀器、耗材 SC 減樣選擇培養基分光光度計實驗步驟 一、分光光度測定法1. YPAD 過夜培養物用水 100 倍稀釋，而 SC 減樣選擇培養基過夜培養物 10 倍稀釋。2. 用分光光度計測定 600 nm 處的光密度。3. 記住稀釋倍數，計算原始培養物的細胞數。二、血細
釀酒酵母培養條件實驗
液體培養基中細胞滴度的檢測 菌落的影印培養 酵母培養物的儲存 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 酵母在瓊脂或液體培養基中的理想培養溫度是30℃，培養皿平板應倒
釀酒酵母培養條件實驗
液體培養基中細胞滴度的檢測 菌落的影印培養 酵母培養物的儲存 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 酵母在瓊脂或液體培養基中的理想培養溫度是30℃，培養皿平板應倒
酵母感受態細胞制備實驗
化學法 試劑盒制備法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 感受態是受體最容易接受外源DNA片段并實現轉化的一種生理狀態，用對應化學物質處理細胞后，細胞逐漸形成感受態細胞并
感受態制備：酵母感受態細胞制備實驗
酵母感受態細胞制備可以：（1）用于建立酵母轉化體系；（2）用于酵母表達系統構建；（3）用于酵母其他分子生物學研究。實驗方法實驗材料釀酒酵母 試劑、試劑盒YPDA液體培養基 蒸餾水 甘油 二甲基亞砜 儀器、耗材培養皿 離心機 離心管 冰箱 實驗步驟一、試劑與耗材 1. ?試劑?細菌用-酵母提取物（Fi
畢赤酵母高效轉化實驗方案
畢赤酵母高效轉化實驗方案1.收集菌體取1mlGS115過夜培養物(OD約6-10) 分裝到1.5ml EP管中，4℃、10000g 離心1min，棄上清，沉淀用無菌水(4℃)洗滌，同樣條件下離心，棄上清。2.菌體處理加入1ml處理液，室溫下放置20min。處理液：10mM LiAc10mM DTT0
釀酒酵母培養條件實驗_酵母培養物的儲存
實驗方法原理酵母在瓊脂或液體培養基中的理想培養溫度是30℃，培養皿平板應倒置放入塑料盒中，于孵箱或培養室內進行培養。當孵育時間超過2或3天時，塑料盒可防止平板上的瓊脂干裂。當使用液體培養基培養時，要使用旋轉式或往復式搖床，至少每分鐘200轉，以保證充分通氣；進行大體積液體培養時使用錐形瓶，培養基為瓶
畢赤酵母PEG1000轉化方法
實驗概要本文介紹了畢赤酵母PEG1000轉化方法。據稱PEG比LiCl 方法好，但不如去壁細胞及電轉化法，但對沒有電轉裝置的人來說，更方便，效率為102-103/ugDNA。主要試劑Buffer A：1M山梨醇，10mM bicine(N－二(羥乙基)甘氨酸)pH8.35，3%(v/v)乙二醇Buf
酵母轉化實驗
實驗材料酵母菌株質粒儀器、耗材YPD 平板SC-ura平板產孢子平板實驗步驟展開
酵母轉化實驗
實驗材料?酵母試劑、試劑盒?YPDYPAD腺嘌呤半硫酸TE乙酸鋰儀器、耗材?搖床水浴鍋轉子離心機培養箱實驗步驟 1.? 在開始實驗前2天，接種待轉化的酵母菌株的單菌落于5 ml YPD培養基中，于30℃恒溫搖床，培養過夜。?2.? 轉化的前一天晚上，往1 L 無菌燒瓶中加入300 ml YPAD
酵母感受態細胞制備實驗——化學法
酵母感受態細胞制備可應用于：（1）建立酵母轉化體系；（2）酵母表達系統構建；（3）酵母其他分子生物學研究。實驗方法原理感受態是受體最容易接受外源DNA片段并實現轉化的一種生理狀態，用對應化學物質處理細胞后，細胞逐漸形成感受態細胞并進行轉化。化學法簡單，快速，穩定，重復性好，廣泛用于外源基因的轉化。實
非洲粟酒裂殖酵母的轉化實驗_電穿孔轉化法
實驗材料細胞試劑、試劑盒三梨糖醇儀器、耗材PM 或 YE 培養基實驗步驟1. 用 PM 或 YE 培養基培養細胞，至滴度到每毫升 1X107?個細胞。2. 用冰冷的過濾除菌的 1.2 mol/L 三梨糖醇洗細胞 3 遍，以降低細胞的導電性。3. 用冰冷的 1.2 mol/L 三梨糖醇重懸細胞，使滴度
釀酒酵母培養基的制備實驗
YPAD培養基的制備 SC培養基 SC選擇培養基混合物的制備 用于檢測酵母中β-半乳糖苷酶活性的培養 用于篩選針對URA3表型的培養基 ? ? ? ? ? ?
釀酒酵母培養基的制備實驗
試劑、試劑盒 酵母提取物蛋白胨葡萄糖偏硫酸腺嘌呤瓊脂水儀器、耗材 錐形瓶實驗步驟 1. 在 1 L 的帶螺旋蓋的瓶中或錐形瓶中將下面的成分溶于 500 ml 水中，置于振蕩器上。酵母提取物 6.0 g，蛋白胨 12.0 g，葡萄糖 12.0 g，偏硫酸腺嘌呤 60.0 mg，瓊脂 10.0 g，加水
釀酒酵母培養基的制備實驗
YPAD培養基的制備 SC培養基 SC選擇培養基混合物的制備 用于檢測酵母中β-半乳糖苷酶活性的培養 用于篩選針對URA3表型的培養基 ? ? ? ? ? ?