細胞免疫熒光染色實驗
實驗原理利用抗原抗體反應，鑒定細胞是否表達某種蛋白。細胞經固定后，用特異性抗體（一抗）識別目的蛋白，再用一抗的抗體（二抗）識別一抗，二抗一般耦聯熒光基團或化學反應基團，通過熒光或化學發光顯示目的蛋白。主要試劑防淬滅劑、DPBS、指甲油、4% PFA、10 μg/mL PI、10 μg/mL Hoechst 33342、封閉液、BSA、Triton-X100主要設備玻璃片、細胞培養皿、激光共聚焦顯微鏡實驗步驟①將潔凈無菌的玻璃片放在細胞培養皿底部中央，接種細胞，待細胞生長到合適密度時，棄培養液，室溫用4% PFA固定細胞。注意：細胞固定時間取決于染色的細胞類型，單層細胞需要固定10 min左右，mESCs和hESCs需要20 min左右，如果是胚胎或者擬胚體（Embryoid Bodies, EBs）需要30 min以上。②洗滌：吸棄4%PFA，然后用DPBS洗3次，每次5 min。③通透：用0.5% Triton-X100室溫通......閱讀全文
細胞免疫熒光染色實驗
實驗原理利用抗原抗體反應，鑒定細胞是否表達某種蛋白。細胞經固定后，用特異性抗體（一抗）識別目的蛋白，再用一抗的抗體（二抗）識別一抗，二抗一般耦聯熒光基團或化學反應基團，通過熒光或化學發光顯示目的蛋白。主要試劑防淬滅劑、DPBS、指甲油、4% PFA、10 μg/mL PI、10 μg/mL Hoec
細胞免疫熒光染色實驗
實驗原理利用抗原抗體反應，鑒定細胞是否表達某種蛋白。細胞經固定后，用特異性抗體（一抗）識別目的蛋白，再用一抗的抗體（二抗）識別一抗，二抗一般耦聯熒光基團或化學反應基團，通過熒光或化學發光顯示目的蛋白。主要試劑防淬滅劑、DPBS、指甲油、4% PFA、10 μg/mL PI、10 μg/mL Hoec
細胞免疫熒光染色
實驗概要細胞免疫熒光染色實驗原理利用抗原抗體反應，鑒定細胞是否表達某種蛋白。細胞經固定后，用特異性抗體（一抗）識別目的蛋白，再用一抗的抗體（二抗）識別一抗，二抗一般耦聯熒光基團或化學反應基團，通過熒光或化學發光顯示目的蛋白。主要試劑防淬滅劑、DPBS、指甲油、4% PFA、10 μg/mL PI、1
免疫熒光細胞化學染色方法
免疫熒光細胞化學染色方法 一、標本制作 可制作涂片、印片、細胞單層培養物、組織切片，經適當固定或不固定，作免疫熒光染色用。 二、熒光抗體染色方法 （一）直接法 1．染色 切片經固定后，滴加經稀釋至染色效價如1：8或1：16的熒光抗體（如兔抗人γ-球蛋白熒光 抗體或兔抗人 IgG 或 IgA 熒光抗體
免疫熒光細胞化學染色方法
一、標本制作 可制作涂片、印片、細胞單層培養物、組織切片，經適當固定或不固定，作免疫熒光染色用。 二、熒光抗體染色方法 （一）直接法 1．染色 切片經固定后，滴加經稀釋至染色效價如1：8或1：16的熒光抗體（如兔抗人γ-球蛋白熒光抗體或兔抗人IgG或IgA熒光抗體等），在室溫或37℃染色30
病毒免疫熒光實驗_?熒光抗體染色
實驗材料細胞小玻片標本試劑、試劑盒熒光抗體實驗步驟熒光抗體染色按不同反應機制，可有以下幾種：1.直接法 用已知特異性病毒抗體與熒光素結合，制成熒光特異性抗體，直接與細胞或組織中相應病毒抗原結合，在熒光顯微鏡下即可見病毒或病毒抗原存在部位呈現特異性熒光。此法特異簡便，但一種熒光抗體只能檢查一種抗原，特
免疫熒光組織（細胞）化學染色方法
免疫熒光組織（細胞）化學染色方法：直接法基本原理 將熒光素標記在相應的抗體上，直接與相應抗原反應。其優點是方法簡便、特異性高，非特異性熒光染色少。缺點是敏感性偏低；而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體。此法常用于細菌、病毒等微生物的快速檢查和腎炎活檢、皮膚活檢的免疫病理檢查。 試劑與儀器 磷酸鹽
免疫熒光組織（細胞）化學染色方法
免疫熒光組織（細胞）化學染色方法：直接法基本原理?將熒光素標記在相應的抗體上，直接與相應抗原反應。其優點是方法簡便、特異性高，非特異性熒光染色少。缺點是敏感性偏低；而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體。此法常用于細菌、病毒等微生物的快速檢查和腎炎活檢、皮膚活檢的免疫病理檢查。?試劑與儀器?磷酸鹽
免疫熒光組織（細胞）化學染色方法
一、其它熒光抗體染色方法1、膜抗原熒光抗體染色法本法應用直接法或間接法的原理和步驟，可對活細胞在試管內進行染色，常用于T和B細胞、細胞培養物、瘤細胞抗原和受體等的檢查和研究，陽性熒光主要在細胞膜上。FACS即采用此法原理。2、雙重染色法在同一標本上有兩個抗原需要同時顯示（如A抗原和B抗原），A抗原的
免疫熒光細胞化學染色方法1
一、標本制作可制作涂片、印片、細胞單層培養物、組織切片，經適當固定或不固定，作免疫熒光染色用。 二、熒光抗體染色方法 （一）直接法 1．染色 切片經固定后，滴加經稀釋至染色效價如1：8或1：16的熒光抗體（如兔抗人γ-球蛋白熒光抗體或兔抗人IgG或IgA熒光抗體等），
免疫熒光細胞化學染色方法2
2．方法步驟 （1）涂片或切片固定。 （2）吸取經適當稀釋之免疫血清及補體之等量混合液（此時免疫血清及補體又都稀釋一倍）滴于切片上，37℃作用30min，置于保持一定濕度的染色盒內。 （3）用緩沖鹽水洗2次，攪拌，每次5min，吸干標本周圍水液。
細胞免疫熒光實驗步驟
細胞免疫熒光主要用于蛋白定位研究和細胞內信號轉導，細胞免疫熒光技術是利用免疫技術和熒光標記技術相結合，原理就是利用抗原-抗體反應之后，采用熒光標記，標記完成后，顯微鏡下觀察細胞內某種抗原成分的多少，從而做出一個定位研究，也可以為細胞內信號傳導提供一個明確的指導，細胞免疫熒光具有敏感性強、特異性高、速
病毒免疫熒光實驗_病毒染色標本的制備
實驗材料待檢測病毒試劑、試劑盒丙酮0. 01mol L PBS95%乙醇二甲苯儀器、耗材玻片實驗步驟1. 培養細胞小玻片標本的制備 根據所檢測病毒種類，選擇敏感細胞進行培養，如乙型肝炎病毒用乳地鼠腎細胞 (BHK21 細胞）培養，森林腦炎病毒用綠猴腎細胞 (Vero 細胞）培養，登革熱病毒用白紋伊蚊
細胞核蛋白的免疫熒光染色方法
細胞免疫熒光的詳細操作步驟1，取出細胞爬片放到35mm或60mm用過的細胞培養皿里，PBS洗三遍。注意有的時候作的細胞爬片可能比較小，因此夾取的時候要小心。2，4%多聚甲醛固定20分鐘，PBS洗三遍。3，0.2%TritonX100通透10分鐘，PBS洗三遍。4，與二抗相同宿主的血清封閉30分鐘，P
免疫熒光組織（細胞）化學染色方法：間接法
一、原理與意義?免疫熒光組織（細胞）化學染色方法——間接法，是一種熒光抗體染色法。該方法只需制備一種熒光抗體可以檢出多種抗原，敏感性較高，操作方法較易掌握，而且能解決一些不易制備動物免疫血清的病原體（如麻疹）等的研究和檢查，所以已被廣泛應用于自身抗體和感染病人血清的試驗。?二、操作流程?（一）雙層法
細胞核蛋白的免疫熒光染色方法
細胞免疫熒光的詳細操作步驟1，取出細胞爬片放到35mm或60mm用過的細胞培養皿里，PBS洗三遍。注意有的時候作的細胞爬片可能比較小，因此夾取的時候要小心。2，4%多聚甲醛固定20分鐘，PBS洗三遍。3，0.2%TritonX100通透10分鐘，PBS洗三遍。4，與二抗相同宿主的血清封閉30分鐘，P
免疫熒光染色技術
抗原物質固定劑固定條件（min）蛋白質抗原95%～100%乙醇室溫3～10酶、激素丙?酮4℃?30免疫球蛋白四氯化碳病?毒丙酮、四氯化碳、無水乙醇室溫5～10或4℃?30～60多糖、細菌等微火加熱，甲醇、10%甲醛、丙酮室溫5～10或4℃?30～60類?脂?（異嗜性抗原）10%甲醛，10%佛茂爾（F
LSCM免疫熒光染色
免疫熒光染色?使用預冷的?PBS?緩沖溶液洗滌細胞，去除殘留的培養液。立即加入?4%?多聚甲醛(PFA)固定液。在室溫固定15 min。用?PBS?洗滌殘留的固定液后，用?0. 5% Triton X-100?處理細胞?5 min，這樣可以通透細胞膜，使抗體等大分子能通過細胞膜，進到固定細胞的內部。
組織免疫熒光染色
概述： 織免疫熒光染色多是使用組織的冰凍切片，因為在切片過程中基本上暴露了細胞和細胞核內結構，故不需要使用細胞通透劑(Triton-100,NP-40)。染色后的切片應放置冰箱內避光保存，防止熒光淬滅。常用的熒光素有：異硫氰酸(fluorescein isothiocyanate,FITC,發
撫生試劑其它免疫熒光細胞化學染色方法
?? 本法應用直接法或間接法的原理和步驟，可對活細胞在試管內進行染色，常用于T細胞和B細胞、細胞培養物、瘤細胞抗原和受體等的檢查和研究，陽性熒光主要在細胞膜上。膜抗原熒光抗體檢測法(FACS)即采用此原理。???? 雙重染色法?? ?在同一標本上有兩個抗原需要同時顯示(如A抗原和B抗原)，A抗原的抗
細胞鐵染色實驗
實驗方法原理 骨髓內的鐵蛋白及含鐵血黃素（細胞外鐵）和幼稚紅細胞的鐵粒（細胞內鐵）在鹽酸環境下與亞鐵氰化鉀作用生成亞鐵氰化鐵，即普魯士藍反應．試劑、試劑盒 鹽酸溶液亞鐵氰化鉀溶液堿性復紅貯存液復染應用液甲醛實驗步驟 一、 實驗試劑：1. 4％鹽酸溶液，小心取濃鹽酸（38％）40ml慢慢滴加至冷蒸
細胞鐵染色實驗
實驗方法原理骨髓內的鐵蛋白及含鐵血黃素（細胞外鐵）和幼稚紅細胞的鐵粒（細胞內鐵）在鹽酸環境下與亞鐵氰化鉀作用生成亞鐵氰化鐵，即普魯士藍反應．試劑、試劑盒鹽酸溶液亞鐵氰化鉀溶液堿性復紅貯存液復染應用液甲醛實驗步驟一、 實驗試劑：1. 4％鹽酸溶液，小心取濃鹽酸（38％）40ml慢慢滴加至冷蒸餾水340
免疫熒光染色（間接法）
1、切片固定后用毛細滴管吸取經適當稀釋的免疫血清滴加在其上，置于染色盒中保持一定的濕度，37℃作用30min。然后用0.01mol/l pH7.2PBS洗兩次，10min，用吸水吸去或吹干余留的液體。?2、再滴加間接熒光抗體（如兔抗人 -球蛋白熒光抗體等），同上步驟，染色30min，37℃，緩沖鹽水
細胞爬片免疫熒光實驗步驟
第一天：1. 在培養板中將已爬好細胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min；2.?用4%的多聚甲醛固定爬片15min， PBS浸洗玻片3次，每次3min；3. 0.5%Triton X-100( PBS配制 )室溫通透20min（細胞膜上表達的抗原省略此步驟）；4. PBS浸洗玻片3次，每次3 min
培養細胞的染色實驗
Giemsa染色法 蘇木精伊紅染色法 Feulgen染色法 吖啶橙染色熒光觀察法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 Giemsa 染色是最常用的方法
什么是免疫熒光染色診斷
免疫熒光染色診斷:用于檢測或定位各種抗原，也可以與其他蛋白質結合，用于檢測或定位抗體。?用免疫熒光技術顯示和檢查細胞或組織內抗原或半抗原物質等方法稱為免疫熒光細胞（或組織）化學技術。原理：免疫學的基本反應是抗原-抗體反應。由于抗原抗體反應具有高度的特異性，所以當抗原抗體發生反應時，只要知道其中的一個
什么是免疫熒光染色診斷
免疫熒光染色診斷:用于檢測或定位各種抗原，也可以與其他蛋白質結合，用于檢測或定位抗體。?用免疫熒光技術顯示和檢查細胞或組織內抗原或半抗原物質等方法稱為免疫熒光細胞（或組織）化學技術。原理：免疫學的基本反應是抗原-抗體反應。由于抗原抗體反應具有高度的特異性，所以當抗原抗體發生反應時，只要知道其中的一個
什么是免疫熒光染色診斷
免疫熒光染色診斷:用于檢測或定位各種抗原，也可以與其他蛋白質結合，用于檢測或定位抗體。?用免疫熒光技術顯示和檢查細胞或組織內抗原或半抗原物質等方法稱為免疫熒光細胞（或組織）化學技術。原理：免疫學的基本反應是抗原-抗體反應。由于抗原抗體反應具有高度的特異性，所以當抗原抗體發生反應時，只要知道其中的一個
什么是免疫熒光染色診斷
免疫熒光染色診斷:用于檢測或定位各種抗原，也可以與其他蛋白質結合，用于檢測或定位抗體。?用免疫熒光技術顯示和檢查細胞或組織內抗原或半抗原物質等方法稱為免疫熒光細胞（或組織）化學技術。原理：免疫學的基本反應是抗原-抗體反應。由于抗原抗體反應具有高度的特異性，所以當抗原抗體發生反應時，只要知道其中的一個
免疫熒光染色原理及步驟
免疫熒光又稱免疫熒光抗體。免疫熒光實驗原理是將熒光素標記在相應的抗體上，直接與相應抗原反應。其優點是方法簡便、特異性高，非特異性熒光染色少，相對使用標記抗體用量偏大。利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。下面詳細介紹免疫熒光染色步驟：1. 滴加 0.01mol/L，pH7.4 的PBS于待