熒光染色觀察藥物誘導細胞凋亡
【原理】 Hoechst 33258 為特異性 DNA 染料，與 A-T 鍵結合，這種染料對死細胞或經 70% 冷乙醇固定的細胞可立即染色。而活細胞的著色是漸進性的，在 10min 內可達飽和。在熒光顯微鏡下，活細胞核呈彌散均勻熒光，出現細胞凋亡時，細胞核或細胞質內可見濃染致密的顆粒塊狀熒光。 【試劑與器材】 1. Hoechst 33258 貯存液： 稱取 Hoechst 33258 試劑 1mg ，用 20ml 蒸餾水溶解后，濾過， 4℃ 避光保存。用時蒸餾水 10 倍稀釋成染色液。 2. 封片液（ pH5.5 ）： 20mmol/L 檸檬酸； 50mmol/L 磷酸氫二鈉； 50% 甘油， 長春新堿 3. 細胞固定液 甲醇、冰乙醇（ 3∶1 ），現配。 【操作步驟】 1. 將細胞以 4 .0×10 8 /L 密度接種于用 12 孔培養板中，每孔 3 mL ， 37......閱讀全文
類器官熒光染色實驗流程（一）
固定注意: 合并2-3孔的幾十個類器官最為理想，但也可只使用一個孔的類器官。使用PFA固定和O.C.T包埋的實驗流程使用1.5 mL的EP管收集類器官，使用4% PFA溶液室溫固定半小時。室溫下用PBS清洗3次，每次5分鐘。然后將樣本轉移至30% 蔗糖溶液4度孵育過夜。第二天，移除蔗糖溶液，在O
什么是免疫熒光染色診斷
免疫熒光染色診斷:用于檢測或定位各種抗原，也可以與其他蛋白質結合，用于檢測或定位抗體。?用免疫熒光技術顯示和檢查細胞或組織內抗原或半抗原物質等方法稱為免疫熒光細胞（或組織）化學技術。原理：免疫學的基本反應是抗原-抗體反應。由于抗原抗體反應具有高度的特異性，所以當抗原抗體發生反應時，只要知道其中的一個
熒光抗體染色三大方法
1.直接染色法將標記的特異熒光抗體直接加在抗原標本上，經一定溫度和時間的染色，洗去未參加反應的多余熒光抗體，在熒光顯微鏡下便可見到被檢抗原與熒光抗體形成的特異性結合物而發出的熒光。直接染色法的優點是：特異性高，操作簡便，比較快速。缺點是：一種標記抗體只能檢查一種抗原，敏感性較差。直接法應設陰、陽性標
雙向凝膠熒光染色與成像實驗
試劑、試劑盒提取液洗滌液溶解液第一向電泳緩沖液還原溶液烷基化溶液瓊脂糖溶液丙烯酰胺凝膠溶液儀器、耗材雙向凝膠電泳光掃描儀或密度計實驗步驟3.1 可溶性總蛋白的提取方法（三氯乙酸/丙酮法）( 1 ) 從擬南芥細胞懸浮培養液中收集細胞。( 2 ) 液氮中研磨細胞。( 3 ) 向研磨好的細胞粉末中加入提取
DNA熒光染色的樣品制備實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 PBS 儀器、耗材 DNA熒光染料 流式細胞儀 實驗步驟
DNA熒光染色的樣品制備實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 PBS 儀器、耗材 DNA熒光染料 流式細胞儀 實驗步驟
雙向凝膠熒光染色與成像實驗
試劑、試劑盒：提取液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?洗滌液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? 溶解液 ?
雙向凝膠熒光染色與成像實驗
試劑、試劑盒?提取液洗滌液溶解液第一向電泳緩沖液還原溶液烷基化溶液瓊脂糖溶液丙烯酰胺凝膠溶液儀器、耗材?雙向凝膠電泳光掃描儀或密度計實驗步驟 3.1 可溶性總蛋白的提取方法（三氯乙酸/丙酮法）( 1 ) 從擬南芥細胞懸浮培養液中收集細胞。( 2 ) 液氮中研磨細胞。( 3 ) 向研磨好的細胞粉末中加
免疫熒光技術熒光抗體染色方法介紹直接法
直接法是指用特異熒光抗體直接滴加于待檢的標本上,由熒光標記的抗體與抗原發生特異結合(圖)。標本中如有相應的抗原存在,即與熒光抗體特異性結合,在鏡下可見有熒光的抗原復合物。此法的優點是操作簡單、特異性高。其缺點是檢查每種抗原均需制備相應的特異性熒光抗體,且敏感性低于間接法。
關于免疫熒光技術—熒光抗體染色的基本介紹
免疫熒光技術(immunofluorescence techniques) 該法是以熒光素，如異硫氰酸熒光素(fluorescence isothiocyanate，FITC)、羅丹明等標記抗體或抗原，以檢測標本中抗原或抗體的方法。免疫熒光技術也包括兩種基本類型，即熒光抗體染色(fluoresc
免疫熒光技術熒光抗體染色方法介紹間接法
間接法是根據抗球蛋白試驗的原理,用熒光素標記抗球蛋白抗體(簡稱標記抗抗體)的方法(圖）。間接法的檢測過程分為兩步:第一步,用未知未標記的抗體(待檢標本)加到已知抗原標本上,在濕盒中在37℃下保溫30min,使抗原抗體充分結合,然后洗滌,除去未結合的抗體;第二步,加上熒光標記的抗球蛋白抗體或抗IgG、
細胞核熒光染色與普通染色的結果有何區別
熒光抗體染色結果判斷：在每次實您好 驗時均需設立實驗對照（陽性和陰性對照）。陽性細胞的顯色分布有胞質型、胞核型和膜表面型三種類型。臨床上根據特異性熒光強度達“＋”（為熒光較弱但清楚可見）以上判定為陽性。
溶酶體染色試劑盒（藍/綠/橙/紅色熒光）溶酶體染色方案
溶酶體（lysosomes）真核細胞中的一種細胞器。1955年由比利時學者C．R．de迪夫等人在鼠肝細胞中發現。溶酶體是單層膜圍繞、內含多種酸性水解酶類的囊泡狀細胞器，其主要功能是進行細胞內消化，專司分解各種外源和內源的大分子物質。細胞內的溶酶體具有異質性，形態大小及內含的水解酶種類都可能有很大的不
培養細胞的染色實驗——吖啶橙染色熒光觀察法
實驗方法原理吖啶橙（Acridine Oringe：AO）是一種常用熒光染料，用于直接染色觀察活細胞或固定染色觀察細胞均可。吖啶橙對DNA和RNA都能染色，快速、簡便和有一定的特異性。吖啶橙對活細胞毒性小，配成2×10－4～1×10－4?可用于直接染色觀察法更好。實驗材料細胞試劑、試劑盒酒精PBSC
雙重染色法免疫熒光組織化學染色步驟
1．一步雙染色法先將兩種熒光標{己抗體按適當比例混合(A+B)，按直接法進行染色。2．二步雙染色法先用TRITC標記的A抗體進行免疫熒光染色，再用FITC標記的B抗體染色，根據兩種抗體的動物種屬不同，可用直接法也可用間接法，結果A抗原呈現橘紅色熒光，而B抗原呈現黃綠色熒光。在應用中，常用的方法是免疫
免疫熒光組織（細胞）化學染色方法
免疫熒光組織（細胞）化學染色方法：直接法基本原理 將熒光素標記在相應的抗體上，直接與相應抗原反應。其優點是方法簡便、特異性高，非特異性熒光染色少。缺點是敏感性偏低；而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體。此法常用于細菌、病毒等微生物的快速檢查和腎炎活檢、皮膚活檢的免疫病理檢查。 試劑與儀器 磷酸鹽
角膜熒光素染色的注意事項
不合宜人群：角膜上皮沒有損傷或有潰瘍者。 檢查前禁忌：禁忌消毒熒光素濾紙。 檢查時要求：操作時注意勿污染被檢者面部及衣服。
免疫熒光組織（細胞）化學染色方法
免疫熒光組織（細胞）化學染色方法：直接法基本原理?將熒光素標記在相應的抗體上，直接與相應抗原反應。其優點是方法簡便、特異性高，非特異性熒光染色少。缺點是敏感性偏低；而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體。此法常用于細菌、病毒等微生物的快速檢查和腎炎活檢、皮膚活檢的免疫病理檢查。?試劑與儀器?磷酸鹽
免疫熒光細胞化學染色方法2
2．方法步驟 （1）涂片或切片固定。 （2）吸取經適當稀釋之免疫血清及補體之等量混合液（此時免疫血清及補體又都稀釋一倍）滴于切片上，37℃作用30min，置于保持一定濕度的染色盒內。 （3）用緩沖鹽水洗2次，攪拌，每次5min，吸干標本周圍水液。
角膜熒光素染色的檢查過程
(1) 用玻璃棒蘸少許熒光素液涂于結膜囊內。 (2) 將熒光素液置于眼藥水瓶內直接滴入結膜囊。 (3) 將熒光素液抽入注射器內向結膜囊內滴入。
角膜熒光素染色的臨床意義
異常結果：角膜、結膜破損處有嫩綠色著色，上皮完整處不染色。如有角膜瘺，點熒光素后作輕壓眼球，可見角膜表面布滿黃綠色熒光素，而在瘺管處則有液體流出，狀如清泉外流。 需要檢查的人群：角膜、結膜上皮損傷或有潰瘍患者。
免疫熒光細胞化學染色方法1
一、標本制作可制作涂片、印片、細胞單層培養物、組織切片，經適當固定或不固定，作免疫熒光染色用。 二、熒光抗體染色方法 （一）直接法 1．染色 切片經固定后，滴加經稀釋至染色效價如1：8或1：16的熒光抗體（如兔抗人γ-球蛋白熒光抗體或兔抗人IgG或IgA熒光抗體等），
免疫熒光組織（細胞）化學染色方法
一、其它熒光抗體染色方法1、膜抗原熒光抗體染色法本法應用直接法或間接法的原理和步驟，可對活細胞在試管內進行染色，常用于T和B細胞、細胞培養物、瘤細胞抗原和受體等的檢查和研究，陽性熒光主要在細胞膜上。FACS即采用此法原理。2、雙重染色法在同一標本上有兩個抗原需要同時顯示（如A抗原和B抗原），A抗原的
直接免疫熒光和間接免疫熒光染色方法的異同
1、接免疫熒光和間接免疫熒光染色方法的不同：直接免疫熒光的實驗方案通常較短，因為它只需要一個標記步驟。間接免疫熒光使用偶聯二抗檢測一抗會增加額外的操作步驟。直接免疫熒光方法的實驗方案步驟較少，更簡單。間接免疫熒光方法中必須選擇適當的二抗，增加了復雜度。這種情況在需要使用多個二抗的多色實驗中尤為突出，
間接免疫熒光和直接免疫熒光染色方法的異同
免疫熒光細胞化學方法的原理是根據抗原抗體反應的規律，把已知的抗原或抗體標記上熒光素，制成熒光抗原或抗體，然后以它作為探針來檢測組織或細胞內的相應物質。方法具體種類有直接法、間接法、夾心法和補體法等。在熒光顯微鏡下，根據其形成復合物所發的熒光，來確定判斷檢測物的來源、性質和部位。?1、直接法：這是最早
免疫熒光染色能進行細胞平均熒光強度分析嗎
細胞免疫熒光的詳細操作步驟1，取出細胞爬片放到35mm或60mm用過的細胞培養皿里，PBS洗三遍。注意有的時候作的細胞爬片可能比較小，因此夾取的時候要小心。2，4%多聚甲醛固定20分鐘，PBS洗三遍。3，0.2%TritonX100通透10分鐘，PBS洗三遍。4，與二抗相同宿主的血清封閉30分鐘，P
直接免疫熒光和間接免疫熒光染色方法的異同
1、接免疫熒光和間接免疫熒光染色方法的不同：直接免疫熒光的實驗方案通常較短，因為它只需要一個標記步驟。間接免疫熒光使用偶聯二抗檢測一抗會增加額外的操作步驟。直接免疫熒光方法的實驗方案步驟較少，更簡單。間接免疫熒光方法中必須選擇適當的二抗，增加了復雜度。這種情況在需要使用多個二抗的多色實驗中尤為突出，
直接免疫熒光和間接免疫熒光染色方法的異同
1、接免疫熒光和間接免疫熒光染色方法的不同：直接免疫熒光的實驗方案通常較短，因為它只需要一個標記步驟。間接免疫熒光使用偶聯二抗檢測一抗會增加額外的操作步驟。直接免疫熒光方法的實驗方案步驟較少，更簡單。間接免疫熒光方法中必須選擇適當的二抗，增加了復雜度。這種情況在需要使用多個二抗的多色實驗中尤為突出，
直接免疫熒光和間接免疫熒光染色方法的異同
1、接免疫熒光和間接免疫熒光染色方法的不同：直接免疫熒光的實驗方案通常較短，因為它只需要一個標記步驟。間接免疫熒光使用偶聯二抗檢測一抗會增加額外的操作步驟。直接免疫熒光方法的實驗方案步驟較少，更簡單。間接免疫熒光方法中必須選擇適當的二抗，增加了復雜度。這種情況在需要使用多個二抗的多色實驗中尤為突出，
熒光原位雜交的染色體分析
熒光原位雜交的染色體分析（一）標本的制備1．室溫下，依次用70％、90％和100％的乙醇脫水5min。2．空氣干燥載玻片。3．若短期使用，載玻片可在室溫貯存數天。若載玻片要長期保存，應在室溫下過夜使組織“老化”（aged），然后放入容器中，該容器密封于含干燥劑的塑料袋內，－70℃保存。根據作者的經驗