一種從凝膠中直接回收DNA進行PCR的方法
分子生物學實驗中，常常需要從瓊脂糖凝膠或聚丙酰胺凝膠中回收DNA，進行純化、探針標記或進一步擴增等。鑒于PCR反應具有高度敏感性，微量模板即可擴增出陽性產物。我們從瓊脂糖凝膠中直接回收DNA進行PCR，取得較滿意的結果，報道如下。 1 材料和方法 1.1 試劑 Taq DNA聚合酶、dNTP、瓊脂糖、PstⅠ內切酶、pUCm-T載體、E.coli JM109細菌購自上海生工生物工程公司，PCR-Select TM cDNA Subtraction Kit和Advantage cDNAPolymerase Mix購自Clontech公司。 1.2 方法 1.2.1 目的基因片段 由本室應用抑制消減雜交法獲得 ［1］ ，片段大小約200～700bp。由于PCR產物的3’末端均帶有一個多聚腺苷酸A，pUCm-T Vector設計了胸腺嘧啶T尾，可與PCR產物直接連接，并轉......閱讀全文
一種從凝膠中直接回收DNA進行PCR的方法
分子生物學實驗中，常常需要從瓊脂糖凝膠或聚丙酰胺凝膠中回收DNA，進行純化、探針標記或進一步擴增等。鑒于PCR反應具有高度敏感性，微量模板即可擴增出陽性產物。我們從瓊脂糖凝膠中直接回收DNA進行PCR，取得較滿意的結果，報道如下。?1 材料和方法?1.1 試劑 Taq DNA聚合酶、dNTP、瓊
直接從PCR產物回收純化DNA
1)直接加90-100μl純化緩沖液于1.5ml離心管，再加入30～300μl PCR反應物，Vortex混合；2)加入1ml樹脂輕輕Vortex 3次，每次間隔1分鐘；3)將取出拉桿的注射器筒（3ml）裝在純化柱上，加入上述DNA與樹脂混合液，然后裝上拉桿，慢慢將混合液推進純化柱內；4)卸下注射器
從瓊脂糖凝膠(Agaros－gel)中回收DNA片段
實驗概要學會從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段的基本技術。實驗原理限制性內切酶切割后的DNA片斷經過電泳后，按分子量大小被分開，排列在瓊脂糖凝膠中，可以將特定的某條DNA帶所在的凝膠切下來，加熱或用特殊的試劑熔解凝膠，使DNA溶回到溶液中，再經過乙醇沉淀或過柱即可獲得目的 DNA酶切片段。主要試劑1. 電
從瓊脂糖凝膠（Agaros－gel）中回收DNA片段
實驗原理限制性內切酶切割后的DNA片斷經過電泳后，按分子量大小被分開，排列在瓊脂糖凝膠中，可以將特定的某條DNA帶所在的凝膠切下來，加熱或用特殊的試劑熔解凝膠，使DNA溶回到溶液中，再經過乙醇沉淀或過柱即可獲得目的 DNA酶切片段。實驗試劑1. 電泳緩沖液2. 熒光染料3. 電泳級瓊脂糖粉4. 10
從瓊脂糖凝膠(Agaros－gel)中回收DNA片段
目的學會從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段的基本技術。2．原理限制性內切酶切割后的DNA片斷經過電泳后，按分子量大小被分開，排列在瓊脂糖凝膠中，可以將特定的某條DNA帶所在的凝膠切下來，加熱或用特殊的試劑熔解凝膠，使DNA溶回到溶液中，再經過乙醇沉淀或過柱即可獲得目的 DNA酶切片段。3．器材旋渦混合器，
從瓊脂糖凝膠(Agaros－gel)中回收DNA片段實驗
實驗原理限制性內切酶切割后的DNA片斷經過電泳后，按分子量大小被分開，排列在瓊脂糖凝膠中，可以將特定的某條DNA帶所在的凝膠切下來，加熱或用特殊的試劑熔解凝膠，使DNA溶回到溶液中，再經過乙醇沉淀或過柱即可獲得目的 DNA酶切片段。實驗試劑1. 電泳緩沖液2. 熒光染料3. 電泳級瓊脂糖粉4. 10
DNA凝膠回收試劑盒使用方法
1.在瓊脂糖凝膠-EB電泳后，在紫外燈上小心的把所需的DNA片段切下，盡量去除多余的凝膠并盡量少帶電泳緩沖液，稱重，裝入1.5 ml離心管。2. 按照凝膠的重量近似的估計其體積，假設其密度為1g/ml，凝膠的體積可按如下方法計算：若凝膠薄片的重量為0.2 g，則其體積為0.2 ml。3. 在上述離心
DNA的酶切消化與凝膠回收
[實驗原理]限制性內切酶是分子操作中重要的工具酶，是一類能夠識別雙鏈DNA分子某種特定的核苷酸序列并切割雙鏈DNA分子的核酸內切酶。可分為3類，Ⅰ和Ⅲ類限制酶兼有甲基化等修飾作用及以來ATP的限制性切割活性，前者結合于識別位點隨即切割DNA，后者則在識別位點切割。Ⅱ類限制酶是由兩種酶分子組成的復合體
脈沖場凝膠中濃縮DNA片段的回收
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 低熔點瓊脂糖切片中的 DNA 首先通過電泳濃縮進入高百分比瓊脂糖凝膠中，然后用瓊脂糖酶處理而分離。最終 DNA 制備通過微透析純化。這種方法在把分離的 DNA 注入小鼠受精卵（Schedl et al. 1993) 或轉染鼠
脈沖場凝膠中濃縮DNA片段的回收
實驗方法原理 低熔點瓊脂糖切片中的 DNA 首先通過電泳濃縮進入高百分比瓊脂糖凝膠中，然后用瓊脂糖酶處理而分離。最終 DNA 制備通過微透析純化。這種方法在把分離的 DNA 注入小鼠受精卵（Schedl et al. 1993) 或轉染鼠胚胎干細胞（Choi et al. 1993) 時是非
脈沖場凝膠中濃縮DNA片段的回收
低熔點瓊脂糖切片中的 DNA 首先通過電泳濃縮進入高百分比瓊脂糖凝膠中，然后用瓊脂糖酶處理而分離。最終 DNA 制備通過微透析純化。這種方法在把分離的 DNA 注入小鼠受精卵（Schedl et al. 1993) 或轉染鼠胚胎干細胞（Choi et al. 1993) 時是非常有效的。本實驗來源「
DNA純化實驗——DNA凝膠回收試劑盒純化法
DNA純化可用于：（1）獲得高純度的DNA；（2）濃縮DNA；（3）測序、遺傳信息分析等分子生物學應用。實驗方法原理本試劑盒適合從各種瓊脂糖凝膠中提取多至 8 μg DNA（70 bp-10 Kb），回收率為 60-85%。瓊脂糖凝膠在溫和的緩沖液(DE-A 溶液)中溶解，其中的保護劑能防止線狀 D
回收DNA進行后續酶切實驗問題
洗脫產物含有殘留的乙醇會影響酶切，請確保徹底去除漂洗緩沖液。具體方法參見回收效率低的解決方案。
瓊脂糖凝膠電泳回收PCR產物
一．原理 DNA片斷的分離與回收是基因工程操作中的一項重要技術，例如可收集特定酶切片斷用于克隆或制備探針，回收PCR產物用于再次鑒定等。回收實驗中兩個最重要的技術指標是純度和回收率：前者未達標時會嚴重影響以后的酶切、連接、標記等酶參與的反應；后者不理想時往往會大大增加前期的工作量。 本實驗采
脈沖場凝膠中DNA片段的直接回收
實驗方法原理 低熔點瓊脂糖制備規模的 PFGE 經常被用于 DNA 片段的分離。不同大小的 DNA 可以用限制酶酶切產生高分辨率酶切圖譜或產生用于插入噬菌體或質粒載體的片段。實驗材料 DNA 大小標準基因組 DNA試劑、試劑盒 溴化乙錠酚：氯仿儀器、耗材 水浴實驗步驟 一、材料1. 緩沖液和溶液溴化
脈沖場凝膠中DNA片段的直接回收
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 低熔點瓊脂糖制備規模的 PFGE 經常被用于 DNA 片段的分離。不同大小的 DNA 可以用限制酶酶切產生高分辨率酶切圖譜或產生用于插入噬菌體或質粒載體的片段。 實驗材料
脈沖場凝膠中DNA片段的直接回收
低熔點瓊脂糖制備規模的 PFGE 經常被用于 DNA 片段的分離。不同大小的 DNA 可以用限制酶酶切產生高分辨率酶切圖譜或產生用于插入噬菌體或質粒載體的片段。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理低熔點瓊脂糖制備規模的 PFGE 經常被用于 DNA 片段的分離。不同大小的 D
利用凝膠回收試劑盒DNA回收效率較低或者未回收到目的...
利用凝膠回收試劑盒DNA回收效率較低或者未回收到目的片段原因分析可能有以下幾個原因：膠塊未完全溶解，可適當延長水浴時間，并增加上下顛倒次數輔助溶解；2. 膠塊體積太大，應先將其切為小塊，分多次回收；3. 電泳緩沖液pH太高，硅基質膜在高鹽低pH結合DNA，如pH太高，應作適當調整；4. 漂洗液中未加
簡述凝膠層析的回收方法
如果不再使用可將其回收，一般方法是將凝膠用水沖洗干凈濾干，依次用70%、90%、95%乙醇脫水平衡至乙醇濃度達90%以上，濾干，再用乙醚洗去乙醇、濾干、干燥保存。濕態保存方法是凝膠漿中加入抑菌劑或水沖洗到中性，密封后高壓滅菌保存。
凝膠過濾層析的回收方法
如果不再使用可將其回收，一般方法是將凝膠用水沖洗干凈濾干，依次用70%、90%、95%乙醇脫水平衡至乙醇濃度達90%以上，濾干，再用乙醚洗去乙醇、濾干、干燥保存。濕態保存方法是凝膠漿中加入抑菌劑或水沖洗到中性，密封后高壓滅菌保存。
凝膠過濾層析的回收方法
一般方法是將凝膠用水沖洗干凈濾干，依次用70%、90%、95%乙醇脫水平衡至乙醇濃度達90%以上，濾干，再用乙醚洗去乙醇、濾干、干燥保存。濕態保存方法是凝膠漿中加入抑菌劑或水沖洗到中性，密封后高壓滅菌保存。
PCR產物及凝膠回收試劑盒MagExtractor?PCR－－Gel－Clean－u
產品索引 5872 中文名稱： PCR產物及凝膠回收試劑盒 英文名稱： MagExtractor?-PCR & Gel Clean up- 產品編號： NPK -600 產品類別： 分子生物學 生產廠家： TOYOBO 產
DNA片段的回收實驗——常規方法
實驗材料NA片段試劑、試劑盒純化試劑盒異丙醇儀器、耗材離心機電泳儀電泳槽取液器微量真空裝置抽濾裝置實驗步驟1. ?PAGE電泳，如EB染色的則在紫外燈下切下目的片斷，如齦染或其他非放染色的則在關下切下目的片斷。2. ?用少量脫緩沖液I將目的片斷膠條洗至一Eppendorf管中，用玻棒將凝膠搗碎，用1
通過PCR方法對微量DNA進行定量分析實驗
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 蛋白酶消化緩沖液20 mg ml蛋白酶K (儲于-20℃)用 50 mmol L Tris . Cl 10 mmol L EDTA pH 7.4 緩沖的酚（儲于室溫）24 ：1（V V)氯仿 異戊醇10 mol L乙酸按冰冷的100%乙醇70%乙醇TE緩沖液pH
通過PCR方法對微量DNA進行定量分析實驗
PCR被用于從每樣品的1?20 000個分子中定量某一特定DNA序列的 數量。此外，它可輔助評估那些造成這類實驗失敗的污染序列的存在。來源：《精編分子生物學實驗指南》第五版實驗材料DNA試劑、試劑盒蛋白酶消化緩沖液20 mg ml蛋白酶K (儲于-20℃)用 50 mmol L Tris . Cl
通過PCR方法對微量DNA進行定量分析實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒
瓊脂糖凝膠電泳DNA回收實驗方法和注意事項
實驗前準備及重要注意事項 1．第一次使用前應按照試劑瓶標簽的說明在Buffer PW中加入無水乙醇。 2．使用前請檢查Buffer PG，如果出現結晶或者沉淀，可在37℃水浴中放置3-5分鐘，即可恢復澄清。 3．電泳時最好使用新的電泳緩沖液，避免影響電泳和回收效果；如下一步實驗
瓊脂糖凝膠電泳DNA回收實驗方法和注意事項
實驗前準備及重要注意事項1．第一次使用前應按照試劑瓶標簽的說明在Buffer PW中加入無水乙醇。2．使用前請檢查Buffer PG，如果出現結晶或者沉淀，可在37℃水浴中放置3-5分鐘，即可恢復澄清。3．電泳時最好使用新的電泳緩沖液，避免影響電泳和回收效果；如下一步實驗要求較高，請盡量使用TAE電
DNA小片段的純化回收
DNA 電泳小于100bp的片斷通常在電泳時就比較難觀察分辨，需要用分辨率很高的瓊脂糖或者丙烯酰胺凝膠。比如Cambrex的NuSieve 3:1或者GTG，或者是大名鼎鼎的MetaPhor瓊脂糖。所以實際上對于小片斷，可以分為兩種情況：一個是真的要回收電泳中特別小的片斷，這種情況我們前面有提到，比
從聚丙烯酰胺凝膠中回收－RNA－片段
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 溴化乙錠 ?洗脫緩沖液 ?儲存液 8mol LLiCl 溶液 ? 異丙醇 ? 70% 乙醇 ? 1XT