用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析實驗——酪氨酸激酶
試劑、試劑盒烯醇化酶酪氨酸激酶分析緩沖液實驗步驟1. 制備酸變性的烯醇化酶從兔肌肉中純化的烯醇化酶通常以硫酸銨沉淀或者懸液的形式存在。(1) 含 100 μg 的烯醇化酶，于 4℃ 全速離心 5 分鐘。(2) 去上清，加入含有 1 mmol/L DTT 的 10 μl 50 mmol/L HEPES 緩沖液（pH 7.0)，徹底混勻，冰浴 30~60 分鐘。(3) 加 10 μl 甘油，混勻，如果當天進行分析實驗就放在冰上。(4) 馬上分析前，往烯醇化酶溶液加 20 μl 100 mmol/L 乙酸，徹底混勻。于 30℃ 水浴 5 分鐘，然后放在冰上。2. 在冰浴的離心管內配制如下 20 μl 反應混合物：5X 酪氨酸激酶分析緩沖液 &nb......閱讀全文
用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析實驗——酪氨酸激酶
試劑、試劑盒烯醇化酶酪氨酸激酶分析緩沖液實驗步驟1. 制備酸變性的烯醇化酶從兔肌肉中純化的烯醇化酶通常以硫酸銨沉淀或者懸液的形式存在。(1) 含 100 μg 的烯醇化酶，于 4℃ 全速離心 5 分鐘。(2) 去上清，加入含有 1 mmol/L DTT 的 10 μl 50 mmol/L HEPES
用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析實驗
ATP儲存液的配制依賴環核苷酸的蛋白質激酶蛋白質激酶C酪蛋白激酶酪氨酸激酶凝膠蛋白質激酶分析試劑、試劑盒ATP儲存液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?實驗步驟一、Mg-ATP 儲存液的配制ATP 買來時通常是鈉鹽。大多
用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析實驗
試劑、試劑盒 ATP儲存液實驗步驟 一、Mg-ATP 儲存液的配制ATP 買來時通常是鈉鹽。大多數激酶需要 ATP 鎂鹽作為高效底物。有時可以用錳代替鎂。1. 20 mmol/L MgCl2 或 MgSO42. 20 mmol/L Na2-ATP以 1:1 的比例混合這兩種溶液，測 pH 值。慢慢將
用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析實驗
ATP儲存液的配制 依賴環核苷酸的蛋白質激酶 蛋白質激酶C 酪蛋白激酶 酪氨酸激酶 凝膠蛋白質激酶分析 ? ? ? ? ? ?
用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析實驗—蛋白質激酶C
試劑、試劑盒PKC 分析緩沖液組蛋白 HI 儲存液磷脂酰絲氨酸甘油二油酸脂實驗步驟1. 在冰浴的離心管內配制如下 20 μl 反應混合物：5X PKC 分析緩沖液??????????????????????????????????????? 4 μl10 mg/ml 組蛋白 HI 儲存液 ?????
用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析實驗——酪蛋白激酶
試劑、試劑盒酪蛋白激酶分析緩沖液β-酪蛋白β-酪蛋白儲存液實驗步驟1. 在置于冰上的離心管內配制含下列成分的 20 μl 反應混合物：5X 酪蛋白激酶分析緩沖液? ????????????????????????? 4 μl ?β-酪蛋白?? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ??????
用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析—凝膠蛋白質激酶分析
試劑、試劑盒Tris-HClDTT鹽酸胍尿素激酶分析緩沖液儀器、耗材SDS-PAGE實驗步驟1. 準備下列材料：SDS-PAGE 要用到的所有試劑50 mmol/L Tris-HCl，室溫（pH 8.0)，1 mmol/L DTT6 mol/L 鹽酸胍，50 mmol/L Tris-HCl，室溫（p
用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析實驗—依賴環核苷酸
試劑、試劑盒激酶分析緩沖液組蛋白 2B 儲存液環核苷酸依賴的蛋白質激酶分析緩沖液環核苷酸儲存液實驗步驟1. 在置于冰上的離心管內配制含下列成分的 20 μl 反應混合物：5X 激酶分析緩沖液 4 μl，10 mg/ml 組蛋白 2B 儲存液 1 μl，[γ-32P] ATP（終濃度為 5 μCi/5
用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析實驗——ATP儲存液的配制
試劑、試劑盒ATP儲存液實驗步驟一、Mg-ATP 儲存液的配制ATP 買來時通常是鈉鹽。大多數激酶需要 ATP 鎂鹽作為高效底物。有時可以用錳代替鎂。1. 20 mmol/L MgCl2?或 MgSO42. 20 mmol/L Na2-ATP以 1:1 的比例混合這兩種溶液，測 pH 值。慢慢將 p
用肽底物檢測蛋白質激酶的活性和特異性實驗
利用肽底物分析酪蛋白激酶Ⅰ和Ⅱ 利用肽底物分析CaMKⅠ和Ⅱ ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 酪氨酸激酶分析緩沖液
用肽底物檢測蛋白質激酶的活性和特異性實驗
利用肽底物分析CaMKⅠ和Ⅱ試劑、試劑盒反應緩沖液儀器、耗材磷酸纖維素濾紙離心管實驗步驟1. 準備 P81 磷酸纖維素濾紙。(1) P81 磷酸纖維素濾紙切成 2cmX2cm 的方塊，折起一個角，用鉛筆在這里做個記號。(2) 將膜塊放在一大張非吸收性材料上，如有機玻璃或者蓋著鋁箔的纖維板。2. 設置
用肽底物檢測蛋白質激酶的活性和特異性實驗1
利用肽底物分析酪蛋白激酶Ⅰ和Ⅱ試劑、試劑盒酪氨酸激酶分析緩沖液酪蛋白激酶肽底物溶液實驗步驟1. 在離心管里配制 50 μl 反應混合物：5X 酪氨酸激酶分析緩沖液?????????????????????????? 10 μl10 mmol/L 酪蛋白激酶肽底物溶液??????????????? 5
酪蛋白激酶分析實驗_用多肽底物
實驗方法原理酪蛋白激酶 I 可用多肽 AspAspAspGluGluSerIleThrArgArg 進行分析，最近釀蛋白激酶 II 也已被特異性的多肽底物分析，如 ArgArgArgGluGluGluThrGluGluGlu（下劃線殘基是磷酸受體）。兩個多肽均可通過精氨酸殘基結合到 P81 磷酸纖維
酪氨酸激酶分析實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 兔肌肉烯醇化酶
酪氨酸激酶分析實驗
實驗材料兔肌肉烯醇化酶試劑、試劑盒1 mmol L DTT 50 mmol L HEPES（pH 7.0 ）甘油100 mmol L 乙酸5 × 酪氨酸激酶反應緩沖液[γ-32P] ATP 溶液冰 2 × SDS-PAGE 樣品緩沖液儀器、耗材30℃ 水浴和沸水浴實驗步驟1. 4℃ 最大速度離心 5
酪氨酸激酶分析實驗
實驗方法原理 實驗材料?兔肌肉烯醇化酶試劑、試劑盒?1 mmol L DTT 50 mmol L HEPES（pH 7.0 ）甘油100 mmol L 乙酸5 × 酪氨酸激酶反應緩沖液[γ-32P] ATP 溶液冰 2 × SDS-PAGE 樣品緩沖液儀器、耗材?30℃ 水浴和沸水浴實驗步驟 1.
蛋白質酪氨酸激酶的基本信息
中文名稱蛋白質酪氨酸激酶英文名稱protein tyrosine kinase;PTK定 義編號：EC 2.7.10.1。特異地將蛋白質底物上某些酪氨酸殘基磷酸化，從而調節該蛋白質功能的酶。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），酶（二級學科）
蛋白質酪氨酸激酶的基本信息
中文名稱蛋白質酪氨酸激酶英文名稱protein tyrosine kinase;PTK定 義編號：EC 2.7.10.1。特異地將蛋白質底物上某些酪氨酸殘基磷酸化，從而調節該蛋白質功能的酶。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），酶（二級學科）
用分離的亞細胞組分進行激酶分析
實驗材料細胞器樣品試劑、試劑盒激酶分析緩沖液ATP儀器、耗材SDS-PAGE 凝膠實驗步驟1. 準備反應混合物：反應體積通常是 50~100 ml。5X 激酶分析緩沖液????????????????????????????? 10 μl[γ-32P] ATP（終濃度 5 μCi/5μmol/L)?
蛋白質濃度分析實驗
BRADFORD分析（BIORAD)BCA分析(PIERCE)三氯乙醇沉淀實驗材料標準蛋白質 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒BSA ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
蛋白質濃度分析實驗
BRADFORD分析（BIORAD) BCA分析(PIERCE) 三氯乙醇沉淀 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 標準蛋白質
蛋白質根據蛋白質結構進行分類
纖維蛋白（fibrous protein）：一類主要的不溶于水的蛋白質，通常都含有呈現相同二級結構的多肽鏈許多纖維蛋白結合緊密，并為單個細胞或整個生物體提供機械強度，起著保護或結構上的作用。球蛋白(globular protein)：緊湊的，近似球形的，含有折疊緊密的多肽鏈的一類蛋白質，許多都溶于水
方案1－用－FLAG抗原表位標記蛋白質進行蛋白質免疫共沉淀
實驗材料抗 FLAGM2 單克隆抗體293 T 細胞試劑、試劑盒抗 FLAGM2 瓊脂糖親和凝膠甘氨酸辣根過氧化物酶IEF緩沖液裂解緩沖液NaCl磷酸鹽緩沖液聚乙烯亞胺RF10培養基RPMI 1640 培養基4 X SDS-PAGE 加樣緩沖液疊氮化鈉胰島素儀器、耗材大型離心機配有檢測 GFP 濾片
用－GST－融合蛋白檢測蛋白質蛋白質相互作用實驗
實驗材料 結合到谷胱甘肽-球脂糖的 GST 融合蛋白試劑、試劑盒 堿性緩沖液 封閉緩沖液 相互作用緩沖液PK 緩沖液還原型谷胱甘肽于 Tris-Cl中洗滌緩沖液 1 洗滌緩沖液 2蛋白酶蛋白激酶 A[y-32P]ATP儀器、耗材 與待篩選蛋白結合的膜或濾膜Sephadex G-50 轉柱實驗步驟 材
用－GST－融合蛋白檢測蛋白質蛋白質相互作用實驗
GST 融合蛋白作為在細菌中表達的重組蛋白，從它們被介紹以來，已用于成千上萬個研究項目中（Smith and johnson 1988)。它們常常被用于制備抗體，這些抗體可用于研究蛋白質-蛋白質相互作用以及分析生化反應。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W
用－GST－融合蛋白檢測蛋白質蛋白質相互作用實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 結合到谷胱甘肽-球脂糖的 GST 融合蛋白 試劑、試劑盒 堿性緩沖液 封閉緩沖液 相
方案12－應用分子掃描器進行蛋白質組分析實驗
試劑、試劑盒乙腈α-氰基-4-羥基肉桂酸（CHCA)α-甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯（TAME）氨基黑封端（capping)試劑考馬斯亮藍 R250HCl石蠟油PBS-TweenTris-Cl胰酶凝膠電泳試劑儀器、耗材電轉膜儀電泳系統IAV膜MALDI 樣品板質譜儀PVDF 膜旋轉雜交儀UV 可見分光光
受體酪氨酸激酶
受體酪氨酸激酶(RTK)是許多多肽生長因子、細胞因子和激素的高親和力細胞表面受體。在人類基因組中鑒定的90個獨特的酪氨酸激酶基因中，有58個編碼受體酪氨酸激酶蛋白。受體酪氨酸激酶已被證明不僅是正常細胞過程的關鍵調節劑，而且在多種癌癥的發展和進展中也具有關鍵作用。受體酪氨酸激酶的突變導致一系列信號級聯
蛋白質根據蛋白質分子的外形進行分類
1．球狀蛋白質分子形狀接近球形，水溶性較好，種類很多，可行使多種多樣的生物學功能。2．纖維狀蛋白質分子外形呈棒狀或纖維狀，大多數不溶于水，是生物體重要的結構成分，或對生物體起保護作用。3．膜蛋白質一般折疊成近球形，插入生物膜，也有一些通過非共價鍵或共價鍵結合在生物膜的表面。生物膜的多數功能是通過膜蛋
蛋白質組學哪些技術需要進行重復實驗？
Label free需要進行三次重復，而iTRAQ、TMT一般建議客戶做3次實驗重復，如果實驗方案后期設計了大量的驗證實驗如WB或ELISA等，最好做也能做兩次重復；如果不進行重復實驗后期的驗證實驗也少，在后期發表文章的時候結果可能會受到一些審稿人的質疑，從而影響文章的發表，特別是一些高分雜志較