小鼠巨噬細胞的分離
實驗步驟基 本 方 案 1 小鼠腹腔巨噬細胞的分離材料小鼠，潔 凈 環 境 中 飼 養（最好置層流柜中飼養）7 3 % (m /V ) 豚 蛋 白 胨 或 者 3 % (W V r) Brewer 硫 基 乙 酸 鹽 肉 湯（Brewerthioglycollate medium，分離炎性腹腔巨嗤細胞用）7 0 % 乙醇收集用培養基：含 5 % (v/V ) FBS (Hyclone，無內毒素）的 D M E M (G I B C O /B R L )Diff-Quik 染液 I、 II 和 III (Baxter)25 G 針頭6m l 和 30m l 注射器鑷 子 和平頭外科剪（浸 于 7 0 % 乙醇中）19 G 針頭50m l 聚丙烯錐底塑料離心管，冰上預冷離 心 機（Shandon/Lipshaw)細 胞 甩 片 機（Shandon/Lipshaw)Sorvall R T 6000 離 心 機 及 H l O O O ......閱讀全文
小－鼠－巨－噬－細－胞－的－分－離
實驗步驟基 本 方 案 1 小鼠腹腔巨噬細胞的分離材料小鼠，潔 凈 環 境 中 飼 養（最好置層流柜中飼養）7 3 % (m /V ) 豚 蛋 白 胨 或 者 3 % (W V r) Brewer 硫 基 乙 酸 鹽 肉 湯（Brewerthioglycollate medium，分離炎性腹腔巨嗤細
小－鼠－巨－噬－細－胞－的－表－型－檢－測
實驗步驟基 本 方 案 直 標 法 檢 測 小 鼠 巨 噬 細 胞 的 表 型材料Sorvall RT 6000B 離心機I . 準 備 4 只 12m m X 75m m 試管，將試管編號為 1?4。每 管 中 加 入 2 X IO7個細胞/ml細胞懸液 50ul。2.每管加入 3 mg/ml 阻
巨－噬－細－胞－一－氧－化－氮－的－檢－測
實驗步驟基本方案材料展開
巨－噬－細－胞－抗－腫－瘤－活－性－的－檢－測
實驗步驟基本方案 [111In] 釋放法檢測巨噬細胞對腫瘤細胞的殺傷作用材 料輔助方案 [111In ] 標記腫瘤靶細胞材 料展開
巨－噬－細－胞－吞－噬－功－能－和－殺－傷－功－能－的－檢－測
實驗步驟基本方案1 巨噬細胞吞噬功能的檢測材 料單核/巨噬細胞：如巨噬細胞株、小鼠腹腔巨噬細胞[單元6.1，需 用 1 0 %豚蛋白胨或4 % (m /V ) 硫基乙酸鹽肉湯]，或 人 P B M C (單 元 8.1)平衡鹽溶液（balanced salt solution， BSS)細菌（如單核
人－NK－T－細－胞－的－分－離－和－擴－增
實驗步驟基本方案 1 NK T 細胞的鑒定材 料外周肝素抗凝血P B SR P M I -1640 培養基，含 1 0 % (V /V ) 人血清或 F C S 以 及 10U /m l I L -2 (可選）流 式 細 胞 緩 沖 液（flow cytometry buffer， FCbuffer
磁－珠－法－分－離T－細－胞－和－B－細胞
實驗步驟基 本 方 案 1 用 AUTOMACS 系 統 進行 總 T 細胞、 CD4?+細 胞 或 CD8+T細胞的自動分離材 料小鼠HBSS 洗滌緩沖液基 本 方 案 2 使 用 AUTOMACS 系 統 進 行 B 細胞的自動分選材 料小鼠HBSS 洗滌緩沖液MACS 緩沖液CD45R (B2
P－C－R－檢－測－小－鼠－T－細－胞－受－體－表－達
實驗步驟?基本方案 I P C R 分析小鼠 T C R 基因表達材 料正常小鼠的組織勻漿或者是 H B S S 制備的單個細胞懸液（IO4?IO7) (附 錄 1)無菌水展開
小鼠巨噬細胞的分離
基 本 方 案 1 小鼠腹腔巨噬細胞的分離材料小鼠，潔 凈 環 境 中 飼 養（最好置層流柜中飼養）7 3 % (m /V ) 豚 蛋 白 胨 或 者 3 % (W V r) Brewer 硫 基 乙 酸 鹽 肉 湯（Brewerthioglycollate medium，分離炎性腹腔巨嗤細胞用）7
ELISPOT方－法－檢－測－分－泌－細－胞－因－子－的－細－胞
實驗步驟基本方案材 料包被緩沖液洗液：含 0.25% (v/v) Tween 20 的 PBS 溶液阻斷緩沖液：含 5 % (m/V) BSA 或 FCS 的 PBS 溶液VRPMMO 完全培養基（或其他適宜培養基）分泌細胞因子的細胞（小鼠或人的）絲裂原，抗原或其他促細胞因子分泌的刺激物帶有標記物的
B－細－胞－分－泌－抗－體－的－檢－測
實驗步驟基 本 方案材 料外周 血 單 個 核 細 胞（P B M C ; 單 元 8.1)RPMI- 5 和 RPMI-IO 完全培養基P W M 溶液9 6 孔 平 底 培 養 板（Costar)1 . 計 數 PBMC (附錄 3A ) ， 用 RPMI-5 完全培養基調整濃度至 4 X 10
細－胞－毒－性－T－淋－巴－細－胞－的－誘－導－及－檢－測
實驗步驟基 本 方 案 1 從 C TL 前體中誘導細胞毒性注意：反應細胞應根據抗原的種類選擇是否需要進行體內致敏。材 料反應細胞來源：未致敏的或者體內致敏的小鼠脾臟細胞（見輔助方案 1 和 2致敏培養基刺激細胞來源：未修飾或半抗原修飾的小鼠脾臟細胞（見輔助方案 3)R P M I -1 0 完全培
流－式－細－胞－儀－檢－測－全－血－的－人－淋－巴－細－胞
實驗步驟基本方案材 料（打 V 項 目 見 附 錄 1)全血，通 常 用 E D T A 抗凝P B S ，有 或 無 0.1% (m /V ) 疊氮鈉，過濾除菌單 克 隆 抗 體（標記的，未標記的或生物素化的），通過滴定確定最佳工作濃度間 標 二 抗（僅用于未標記的一抗）F T T C 標記的鏈霉
干細胞的鑒定實驗——流－式－細－胞－儀－檢－測－分－析－技－術
實驗步驟流 式 細 胞 儀 檢 測 分 析 技 術實 驗 材 料(1) 不同來源的干細胞，細胞數不少于 5xl0?5?個/管。(2) 熒光標記的抗體或抗體及熒光二抗。(3)PBS。實 驗 步 驟(1) 將 細 胞 用 PBS 充分洗滌后重懸于 5000 PBS 中，如果細胞收集和鑒定不能同天完成，可
染－性－疾－病－動－物－模－型——巨細胞病毒感染小鼠模型的建立
實驗步驟?基 本 方 案 巨 細 胞 病 毒 感 染 小 鼠 模 型材 料B A B L /c 小 鼠（新生或成鼠）或其他品系純化的鼠巨細胞病毒（m C M V ; 見輔助方案 1 ) 或 唾 液 腺 病 毒（S G V ，見輔助方案2 )完全培養基鋼 網（0 ?45m m )Ia.感染新生小鼠：用
人單核/－巨噬細胞的表型檢測
實驗步驟基本方案材料待 測 單 個 核 細 胞（肝素抗凝血或肝素抗凝骨髓）或 外 周 血 單 個 核 細 胞（單 元 8.1)或者單核/巨 噬 細 胞（單 元 8. 5 , 推薦采用陰性分選）PBSPBS/肝素：含 0.1% (V/V ) 肝 素 的 PBS阻 斷 IgG，濃 度 3 mg/ml (
人單核/－巨噬細胞的表型檢測
基本方案材料待 測 單 個 核 細 胞（肝素抗凝血或肝素抗凝骨髓）或 外 周 血 單 個 核 細 胞（單 元 8.1)或者單核/巨 噬 細 胞（單 元 8. 5 , 推薦采用陰性分選）PBSPBS/肝素：含 0.1% (V/V ) 肝 素 的 PBS阻 斷 IgG，濃 度 3 mg/ml (如正常小
T－細－胞－克－隆－的－建－立
實驗步驟基本方案 1 產生和維持同種反應性 T h 和 CTL 克隆盡管同種反應性 T 細胞可以從未刺激的脾細胞或淋巴結細胞中產生，但如果細胞在初次混合淋巴細胞（M L C ) 中第一次被同種抗原刺激，反應細胞的得率會更高。見以下介紹。材 料同種反應性小鼠脾臟 T 細胞V H B S S (可選使用
淋－巴－細－胞－活－化－過－程－中－肌－醇－磷－脂－周－轉－的－分－析
實驗步驟基 本 方 案 1 通 過 道 威 克 斯（DOWEX) 離 子 交 換 層 析 分 析 [3H] 肌醇磷酸材料備 選 方 案 通 過 HPLC 方 法 分 析 [3H] 肌醇磷酸附加材料[3?H ] InsP 樣 本（見基本方案，步 驟 6) 和標準品除 氣 的 H PLC 級水2mol/
胞質小RNA的概念
中文名稱胞質小RNA英文名稱small cytoplasmic RNA;scRNA定 義細胞質中的小分子RNA。通常指轉移核糖核酸(tRNA)和小的核糖體RNA(rRNA)，如5S rRNA、5.8S rRNA等。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），核酸與基因（二級學科）
HIV的檢測與分析_在單核細胞和巨噬細胞中培養－HIV
實驗步驟基 本 方 案 單 核 細 胞 來 源 的 巨 噬 細 胞 培 養 和 H IV 感染藥物或生長因子的加入時間依試劑及實驗方案而定，單核細胞通常在分離的當天加入 ，成熟的單核細胞來源的巨卩蜜細胞（monocyte-derived macrophages， M D M ) 則在H I V 感染
用流式細胞儀檢測細胞因子的分泌和分離
實驗步驟基本方案細胞因子分泌實驗材 料冰冷的或 37°C 預溫的培養液。例如，培養人細胞用含 1 0 % 人 A B 血漿或自身血清的 1640 完全培養液。培養小鼠細胞用含 1 0 % 小鼠血清的 R P M 1-1640 完全培養基抗原， 1?10ug/m l 肽 或 1?100ug/m l 蛋
流式細胞儀檢測細胞因子的分泌和分離分泌細胞因子細胞
實驗步驟基本方案細胞因子分泌實驗材 料冰冷的或 37°C 預溫的培養液。例如，培養人細胞用含 1 0 % 人 A B 血漿或自身血清的 1640 完全培養液。培養小鼠細胞用含 1 0 % 小鼠血清的 R P M 1-1640 完全培養基抗原， 1?10ug/m l 肽 或 1?100ug/m l 蛋
人胚胎干細胞系:衍生與培養實驗——細－胞－培－養－基－成－分
實驗步驟2.2.5 BRL-條件培養基B R L 細胞在大鼠肝細胞培養基（BRL-CM) 中生長至匯合，用新鮮培養基更換一次 ， 3 天后收集這些培養基。所有培養基用無菌的、孔 徑 0.2um 的 P E S 濾膜過濾，特別是來自其他細胞類型的條件培養基。應該注意的是：在細胞分化研究中可能被用到的生
用流式細胞儀檢測細胞因子的分泌和分離分泌細胞因...
用流式細胞儀檢測細胞因子的分泌和分離 分泌細胞因子的細胞基本方案細胞因子分泌實驗材 料冰冷的或 37°C 預溫的培養液。例如，培養人細胞用含 1 0 % 人 A B 血漿或自身血清的 1640 完全培養液。培養小鼠細胞用含 1 0 % 小鼠血清的 R P M 1-1640 完全培養基抗原， 1?10
分廣離廣峰太弱問題
a.離于源的溫度、電流過高(超過裂解溫度和電離電流)；排除方法：調整離子源溫度、電流。b. 化學電離氣壓過高或過低(對于化學電離源)；排除方法：調整化學電離氣壓。
抗原呈遞細胞的選擇和制備（一）
基本方案 過 利 斯 特 氏 菌 刺 激 制 備 腹 腔 巨 噬 細 胞材 料單核細胞增多性利斯特氏菌無 菌 PBSH -2 相 合 小 鼠（見 表 A .2A .1)，包括正常和提前 3 周注射了利斯特氏菌的小鼠V冰浴的 D M E M 培養基3 % (V A O 乙酸0.4% (m /V ) 臺
抗原呈遞細胞的選擇和制備
實驗步驟基本方案 過 利 斯 特 氏 菌 刺 激 制 備 腹 腔 巨 噬 細 胞材 料單核細胞增多性利斯特氏菌無 菌 PBSH -2 相 合 小 鼠（見 表 A .2A .1)，包括正常和提前 3 周注射了利斯特氏菌的小鼠V冰浴的 D M E M 培養基3 % (V A O 乙酸0.4% (m /V
研究揭示沙門菌持續性感染難以防控的新機制
近日，華南農業大學獸醫學院教授張建民團隊同合作者在國家自然科學基金等項目的資助下，在國際期刊《自噬》（Autophagy）在線發表最新研究成果，揭示了鼠傷寒沙門菌通過SseJ-PHB2-PINK1-PRKN途徑利用宿主細胞的線粒體自噬實現胞內存活并造成持續感染的分子機制。 沙門菌是一種重要的人
巨噬細胞吞噬功能和殺傷功能的檢測
基本方案1 巨噬細胞吞噬功能的檢測材 料單核/巨噬細胞：如巨噬細胞株、小鼠腹腔巨噬細胞[單元6.1，需 用 1 0 %豚蛋白胨或4 % (m /V ) 硫基乙酸鹽肉湯]，或 人 P B M C (單 元 8.1)平衡鹽溶液（balanced salt solution， BSS)細菌（如單核細胞增多