基于數字PCR的單分子DNA定量技術研究進展（一）
摘要 數字PCR是一項針對單分子目標DNA的絕對定量技術。該技術是將含有DNA模板的反應溶液分配到大量獨立的反應室中并且發生擴增反應，通過統計反應室中的陽性信號來定量DNA的拷貝數。DNA樣品在反應室中隨機和獨立分布是單分子成功擴增和準確定量D NA拷貝數的關鍵因素。本文綜述了數字PCR的發展歷史、數字PCR與實時熒光定量P CR的區別，以及數字PCR在臨床診斷、轉基因成分定量、單細胞基因表達、環境微生物檢測和下一代測序等方面的最新進展，并展望了該技術的應用前景 關鍵詞 數字PCR，絕對定量，實時熒光定量PCR，拷貝數，單分子。 核酸的序列、多樣性和豐度分析是現代生物學的基礎。核酸定量技術在診斷和個體化醫療、食品檢驗和轉基因生物檢測、病原體鑒定、法醫科學等方面已被廣泛應用，同時這些應用也推動了核酸定量技術的進步。DNA分子擴增技術的應用促進了分子生物學技術的發展[2]。精確定量 DNA 拷貝數是現代分子生物學和醫學的......閱讀全文
基于數字PCR的單分子DNA定量技術研究進展（一）
摘要 數字PCR是一項針對單分子目標DNA的絕對定量技術。該技術是將含有DNA模板的反應溶液分配到大量獨立的反應室中并且發生擴增反應，通過統計反應室中的陽性信號來定量DNA的拷貝數。DNA樣品在反應室中隨機和獨立分布是單分子成功擴增和準確定量D NA拷貝數的關鍵因素。本文綜述了數字PCR的發展歷
基于數字PCR的單分子DNA定量技術研究進展（二）
2 ?qPCR與dPCR比較研究 qPCR是目前DNA定量研究的主要技術，該技術通過在PCR反應體系中加入熒光結合染料(SYBR green I) 或熒光標記的探針( 如TaqMan Probes) ，利用實時積累的熒光信號監測整個擴增過程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析，以此來評估
基于數字PCR的單分子DNA定量技術研究進展（四）
NGS 是一種識別和確認未知致病菌的前景廣闊的技術，然而其在生物防御和公共健康應用等方面的時效性，卻往往因為缺乏快速、有效、可靠的自動DNA樣品制備方法而受到限制。為了突破這種限制，Kim 等設計了一種基于流體分布元件的數字微流體(DMF) 平臺，使得多子系統模塊能夠進入自動NGS庫樣品
基于數字PCR的單分子DNA定量技術研究進展（三）
3.2 dPCR在轉基因植物檢測方面的研究?轉基因植物及相關食品的定量分析主要測定轉入基因的相對含量。目前常用qPCR作為核酸定量方法。dPCR可以不需要校準物而準確測量低拷貝的DNA分子。Corbisier 等用dPCR分析了提取于MON810玉米種子的外源檢測基因和hmg基因的拷貝數，驗證了dP
數字PCR技術在DNA定量精準等領域的應用
數字PCR先進的數字PCR技術實現了樣品中的單分子核酸擴增，從而使的DNA定量的精準度提高到了全新水平。Philip與Stilla Technologies的首席執行官兼聯合創始人Rémi Dangla進行了交流，討論了數字PCR技術領域的進展和挑戰。Stilla Technologies公司總部位
基于EVAGREEN?方法的CRYSTAL數字PCR絕對定量檢測
基于EVAGREEN?方法的CRYSTAL數字PCR絕對定量檢測EvaGreen?是一種無致突變性、無細胞毒性的DNA結合染料，NaicaTM?Crystal全自動微滴芯片數字PCR儀系統可兼容EvaGreen?染料進行的數字PCR實驗分析。反應體系中游離的的EvaGreen?染料不發出熒光信號，但
數字PCR在低豐度DNA模板分子的精確定量的應用
由于絕大部分微液滴中只含單個或不含模板分子，使得低豐度DNA模板分子的擴增不受高豐度模板分子擴增的競爭抑制：與此同時，樣品中可能存在的抑制劑也在分配到微液滴的過程中進行了相對稀釋，作用于單個微液滴內模板擴增的抑制劑數量大幅降低，從而提高PCR擴增對抑制劑的耐受程度，因此可應用于諸多臨床樣品（如血液、
DNA分子標記技術研究進展（一）
遺傳標記在遺傳學的建立和發展過程中有著舉足輕重的作用，隨著遺傳學的進一步發展和分子生物學的異軍突起，遺傳標記先后相應地經歷了形態標記、細胞學標記、生化標記和DNA分子標記四個發展階段。前三種標記都是以基因表達的結果為基礎的，是對基因的間接反映；而DNA分子標記則是DNA水平遺傳變異的直接反映，它具有
一文知曉PCR，定量PCR，數字PCR方法選擇
從1985年至今的30多年時間里，PCR分析經歷了三代技術的發展。diyi代傳統PCR技術，采用瓊脂糖凝膠電泳的方法對PCR產物進行定性分析。第二代熒光定量PCR技術，通過在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號的積累實時監控PCR進程，最后用Cq值對基因進行定量分析。第三代數字PCR技術，通過
普通PCR、實時熒光定量PCR、數字PCR技術的功能區別
?? 一、普通PCR技術? ? KARY MULLIS （1944.12.28-2019.8.7）? ? Kary Mullis于1983年發明了聚合酶鏈式反應法（polymerase chain reaction ，PCR），據說是載著女友開車的時候，忽然靈光一閃，想到了PCR原理（論開車的好處）
普通－PCR、實時熒光定量－PCR－和數字－PCR－對比分析（一）
提起 PCR，在生物及其相關行業內可謂如雷貫耳，無人不知無人不曉，其影響之深，應用之廣可見一斑。1985 年，美國 PE-Cetus 公司的 Mullis 等人發明了聚合酶鏈反應（PCR），實現了在試管中模擬細胞內的 DNA 復制。然而，采用 E-coli DNA 聚合酶進行 PCR，由于該酶不
實時熒光定量PCR的研究進展及其應用（一）
?(張蓓，沈立松? 上海第二醫科大學附屬新華醫院上海兒童醫學中心實驗診斷中心)摘要:多聚酶鏈反應飛速的發展使其成為了分子生物學實驗室重要的工具，實時熒光定量PCR(real-timequantitative PCR)技術以其敏感性高、重復性好、速度快和污染少使PCR技術又向前邁進了一步。本文
實時熒光定量PCR的研究進展及其應用（一）
多聚集鏈反應（polymerase chain reaction,PCR）技術發明至今已近20年了，在這期間技術得到了不斷的發展，近年來出現的實時熒光定量PCR（real-time quantitative PCR）技術實現了PCR從定性到定量的飛躍，它以其特異性強、靈敏度高、重復性好、
一文知曉PCR，定量PCR與數字PCR的實驗方法與選擇（一）
從1985年至今的30多年時間里，PCR分析經歷了三代技術的發展。第一代傳統PCR技術，采用瓊脂糖凝膠電泳的方法對PCR產物進行定性分析。第二代熒光定量PCR技術，通過在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號的積累實時監控PCR進程，最后用Cq值對基因進行定量分析。第三代數字PCR技術，通過將P
多重數字PCR技術介紹（一）
什么是數字PCR？數字PCR是一種新的絕對定量PCR，通過對PCR反應物進行有限稀釋，隨后在不同的反應腔室里進行PCR擴增，最后根據泊松分布原理及陽性微滴的個數與比例得出靶分子的起始拷貝數或濃度的技術。什么是多重PCR？多重PCR又稱多重引物PCR或復合PCR，它是在同一PCR反應體系里加上兩對以上
數字PCR技術
數字PCR作為第三代PCR技術，它是將分子生物學與現代微機電、微納制造等工程技術相結合的典范。數字PCR以聚合酶鏈式反應的理論和技術體系為基礎，結合現代微機電和光學檢測技術，實現單分子水平的核酸精確定量檢測。數字PCR的核心思想是將核酸樣品平行劃分為大規模單分子水平的微反應單元，然后對眾多微反應單元
合肥研究院開展數字定量PCR技術技術講座
5月20日，中國科學院合肥物質科學研究院技術生物與農業工程研究所邀請南京潤亞生物科技發展有限責任公司技術總監圍繞數字定量聚合酶鏈式反應技術（簡稱PCR技術）進行專題培訓。 培訓老師首先闡述了PCR技術的發展歷史，PCR經歷了傳統PCR（核酸電泳定性分析）、實時定量PCR（相對定量分析）、數字P
第三代PCR技術紀念Kary－Mullis獲得諾獎30周年
Mullis博士在發明PCR技術后曾這樣描述：“用一個單分子DNA，PCR能在一個下午內產生100百萬個相似的分子。反應很容易進行，只需要一個管子、一些簡單的試劑和一個用來加熱的設備”（Beginning with a single molecule of the genetic material
DNA分子標記技術研究進展（二）
2．第二代分子標記2.1 SSR標記技術??? 在真核生物基因組中存在許多非編碼的重復序列，如重復單位長度在15～65個核苷酸的小衛星DNA(Minisatellite DNA)，重復單位長度在2～6個核苷酸的微衛星DNA(Microsatellite DNA)。小衛星和微衛星DNA分布
熒光定量PCR技術及其應用（一）
熒光定量PCR（也稱TaqMan PCR,以下簡稱FQ-PCR）是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術，該技術是在常規PCR基礎上加入熒光標記探針來實現其定量功能的，與變通PCR相比，FQ-PCR具有許多優點。本文擬就該技術的特點、原理和方法以及應用作一簡
熒光定量PCR技術及其應用（一）
熒光定量PCR（也稱TaqMan PCR,以下簡稱FQ-PCR）是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術，該技術是在常規PCR基礎上加入熒光標記探針來實現其定量功能的，與變通PCR相比，FQ-PCR具有許多優點。本文擬就該技術的特點、原理和方法以及應用作一簡
快速了解熒光定量PCR與數字PCR區別
提起 PCR，在生物及其相關行業內可謂如雷貫耳，無人不知無人不曉，其影響之深，應用之廣可見一斑。 1985 年，美國 PE-Cetus 公司的 Mullis 等人發明了聚合酶鏈反應（PCR），實現了在試管中模擬細胞內的 DNA 復制。然而，采用 E-coli DNA 聚合酶進行 PCR，由
基于量子點的單分子熒光示蹤技術揭示分子馬達的行走...
基于量子點的單分子熒光示蹤技術揭示分子馬達的行走機制在生物體內，分子馬達參與肌肉收縮、胞質運輸、DNA轉錄以及有絲分裂等一系列重要的生命活動。在執行上述功能過程中，分子馬達需要借助ATP水解釋放的能量，完成在細胞骨架上的特定運行軌跡。因此，關于分子馬達沿著細胞骨架的行走機制的研究，對于深刻認識分子馬
一文知曉PCR，定量PCR與數字PCR的實驗方法與選擇（二）
數字 PCR數字 PCR 是通過將樣本DNA隨機分布至獨立的反應單元中，每個反應單元中包含或者不包含1個或多個拷貝的目標分子，所有獨立的反應單元進行平行擴增后，對每個反應單元的陰性或者陽性熒光信號進行檢測并進行統計學分析，就可以計算出原始樣本的拷貝數，無需參考標準品或內源性對照品，也不需要標準曲
Azure－Cielo?實時熒光定量PCR系統在檢測單拷貝DNA的應用
介紹：Azure Cielo? 3和Cielo? 6 實時熒光定量PCR系統具有卓越的靈敏度。該系統配置新型的高性能光學系統，采用16組光纖單孔掃描設計，一根光纖用于高能LED激發，另一根用于光信號檢測，可16孔同時采集(圖1)。特殊的激發/發射方式保證單孔掃描時僅激發一個孔，光纖傳導也有效消除
定量PCR技術
定量PCR（Polymerase Chain Reaction）技術有廣義概念和狹義概念。廣義概念的定量PCR技術是指以外參或內參為標準，通過對PCR終產物的分析或PCR過程的監測，進行PCR起始模板量的定量。 廣義概念下的定量PCR技術可以分為五種類型：（1）外參法+終產物分析。所謂“外參法”
定量PCR技術
? 定量PCR（Polymerase Chain Reaction）技術有廣義概念和狹義概念。廣義概念的定量PCR技術是指以外參或內參為標準，通過對PCR終產物的分析或PCR過程的監測，進行PCR起始模板量的定量。 廣義概念下的定量PCR技術可以分為五種類型： （1）外參法+終產物分析。所謂“外
熒光定量PCR技術的熒光定量PCR的方法
接下來我們就來了解一下熒光定量的主要方法，我們如何選擇合適的方法？熒光定量PCR所使用的熒光化學可分為兩種：熒光探針和熒光染料。而熒光定量 PCR 的方法相應的可分為特異類和非特異類兩類，特異性檢測方法是在PCR反應中利用標記熒光染料的基因特異寡核苷酸探針來檢測產物；而非特異性檢測方法是在在PCR反
PCR技術應用一：診斷單基因疾病
? 自1987年秋以來，PCR技術的應用開創性地推動了產前單基因缺陷者及攜帶者的 診斷。目前PCR還不能用于診斷所有已知缺陷疾病，但極大地擴大了實驗診斷學家對 診斷方法的選擇。JohnHopkins大學的研究人員表明，在診斷基因缺陷疾病方面PCR技 術具有快速、準確、操作靈活等特點。每項進展的實例
數字PCR應用（一）
一． PCR的發展歷史 PCR技術自問世以來，在遺傳病、病原體、癌基因等分子診斷領域和法醫鑒定等方面發揮了巨大作用。第一代 PCR在進行擴增后通過凝膠電泳進行定性分析。 隨著生物分子熒光技術的發展，1992年實時熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR) 應運