基于數字PCR的單分子DNA定量技術研究進展（四）
NGS 是一種識別和確認未知致病菌的前景廣闊的技術，然而其在生物防御和公共健康應用等方面的時效性，卻往往因為缺乏快速、有效、可靠的自動DNA樣品制備方法而受到限制。為了突破這種限制，Kim 等設計了一種基于流體分布元件的數字微流體(DMF) 平臺，使得多子系統模塊能夠進入自動NGS庫樣品制備系統。通過一種新型毛細管接口，可以實現液體在DMF設備與外部流體模塊間的高重復性轉移，使得流路連續，且小滴樣品能夠在一個完整的系統內得到處理。這里，該技術強調了DMF元件平臺和NGS 樣品制備流程中自動運行毛細管接口的效用。將毛細管接口與一種嵌入式非接觸電導檢測器連接，DMF設備實現了目標分析物從樣品流到小液滴的閉環自動片段采集。NGS 中重復次數最多的緩沖液交換與樣品清洗通過使用一種磁珠解決，實現了DMF平臺上平均DNA回收率為(80±4.8)%。 先天性糖基化缺陷是由于機體缺少糖基化作用，主要影響到N 相......閱讀全文
基于數字PCR的單分子DNA定量技術研究進展（四）
NGS 是一種識別和確認未知致病菌的前景廣闊的技術，然而其在生物防御和公共健康應用等方面的時效性，卻往往因為缺乏快速、有效、可靠的自動DNA樣品制備方法而受到限制。為了突破這種限制，Kim 等設計了一種基于流體分布元件的數字微流體(DMF) 平臺，使得多子系統模塊能夠進入自動NGS庫樣品
基于數字PCR的單分子DNA定量技術研究進展（三）
3.2 dPCR在轉基因植物檢測方面的研究?轉基因植物及相關食品的定量分析主要測定轉入基因的相對含量。目前常用qPCR作為核酸定量方法。dPCR可以不需要校準物而準確測量低拷貝的DNA分子。Corbisier 等用dPCR分析了提取于MON810玉米種子的外源檢測基因和hmg基因的拷貝數，驗證了dP
基于數字PCR的單分子DNA定量技術研究進展（一）
摘要 數字PCR是一項針對單分子目標DNA的絕對定量技術。該技術是將含有DNA模板的反應溶液分配到大量獨立的反應室中并且發生擴增反應，通過統計反應室中的陽性信號來定量DNA的拷貝數。DNA樣品在反應室中隨機和獨立分布是單分子成功擴增和準確定量D NA拷貝數的關鍵因素。本文綜述了數字PCR的發展歷
基于數字PCR的單分子DNA定量技術研究進展（二）
2 ?qPCR與dPCR比較研究 qPCR是目前DNA定量研究的主要技術，該技術通過在PCR反應體系中加入熒光結合染料(SYBR green I) 或熒光標記的探針( 如TaqMan Probes) ，利用實時積累的熒光信號監測整個擴增過程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析，以此來評估
數字PCR技術在DNA定量精準等領域的應用
數字PCR先進的數字PCR技術實現了樣品中的單分子核酸擴增，從而使的DNA定量的精準度提高到了全新水平。Philip與Stilla Technologies的首席執行官兼聯合創始人Rémi Dangla進行了交流，討論了數字PCR技術領域的進展和挑戰。Stilla Technologies公司總部位
基于EVAGREEN?方法的CRYSTAL數字PCR絕對定量檢測
基于EVAGREEN?方法的CRYSTAL數字PCR絕對定量檢測EvaGreen?是一種無致突變性、無細胞毒性的DNA結合染料，NaicaTM?Crystal全自動微滴芯片數字PCR儀系統可兼容EvaGreen?染料進行的數字PCR實驗分析。反應體系中游離的的EvaGreen?染料不發出熒光信號，但
數字PCR在低豐度DNA模板分子的精確定量的應用
由于絕大部分微液滴中只含單個或不含模板分子，使得低豐度DNA模板分子的擴增不受高豐度模板分子擴增的競爭抑制：與此同時，樣品中可能存在的抑制劑也在分配到微液滴的過程中進行了相對稀釋，作用于單個微液滴內模板擴增的抑制劑數量大幅降低，從而提高PCR擴增對抑制劑的耐受程度，因此可應用于諸多臨床樣品（如血液、
普通PCR、實時熒光定量PCR、數字PCR技術的功能區別
?? 一、普通PCR技術? ? KARY MULLIS （1944.12.28-2019.8.7）? ? Kary Mullis于1983年發明了聚合酶鏈式反應法（polymerase chain reaction ，PCR），據說是載著女友開車的時候，忽然靈光一閃，想到了PCR原理（論開車的好處）
合肥研究院開展數字定量PCR技術技術講座
5月20日，中國科學院合肥物質科學研究院技術生物與農業工程研究所邀請南京潤亞生物科技發展有限責任公司技術總監圍繞數字定量聚合酶鏈式反應技術（簡稱PCR技術）進行專題培訓。 培訓老師首先闡述了PCR技術的發展歷史，PCR經歷了傳統PCR（核酸電泳定性分析）、實時定量PCR（相對定量分析）、數字P
數字PCR技術
數字PCR作為第三代PCR技術，它是將分子生物學與現代微機電、微納制造等工程技術相結合的典范。數字PCR以聚合酶鏈式反應的理論和技術體系為基礎，結合現代微機電和光學檢測技術，實現單分子水平的核酸精確定量檢測。數字PCR的核心思想是將核酸樣品平行劃分為大規模單分子水平的微反應單元，然后對眾多微反應單元
DNA分子標記技術研究進展（二）
2．第二代分子標記2.1 SSR標記技術??? 在真核生物基因組中存在許多非編碼的重復序列，如重復單位長度在15～65個核苷酸的小衛星DNA(Minisatellite DNA)，重復單位長度在2～6個核苷酸的微衛星DNA(Microsatellite DNA)。小衛星和微衛星DNA分布
DNA分子標記技術研究進展（一）
遺傳標記在遺傳學的建立和發展過程中有著舉足輕重的作用，隨著遺傳學的進一步發展和分子生物學的異軍突起，遺傳標記先后相應地經歷了形態標記、細胞學標記、生化標記和DNA分子標記四個發展階段。前三種標記都是以基因表達的結果為基礎的，是對基因的間接反映；而DNA分子標記則是DNA水平遺傳變異的直接反映，它具有
第三代PCR技術紀念Kary－Mullis獲得諾獎30周年
Mullis博士在發明PCR技術后曾這樣描述：“用一個單分子DNA，PCR能在一個下午內產生100百萬個相似的分子。反應很容易進行，只需要一個管子、一些簡單的試劑和一個用來加熱的設備”（Beginning with a single molecule of the genetic material
快速了解熒光定量PCR與數字PCR區別
提起 PCR，在生物及其相關行業內可謂如雷貫耳，無人不知無人不曉，其影響之深，應用之廣可見一斑。 1985 年，美國 PE-Cetus 公司的 Mullis 等人發明了聚合酶鏈反應（PCR），實現了在試管中模擬細胞內的 DNA 復制。然而，采用 E-coli DNA 聚合酶進行 PCR，由
定量PCR技術
定量PCR（Polymerase Chain Reaction）技術有廣義概念和狹義概念。廣義概念的定量PCR技術是指以外參或內參為標準，通過對PCR終產物的分析或PCR過程的監測，進行PCR起始模板量的定量。 廣義概念下的定量PCR技術可以分為五種類型：（1）外參法+終產物分析。所謂“外參法”
定量PCR技術
? 定量PCR（Polymerase Chain Reaction）技術有廣義概念和狹義概念。廣義概念的定量PCR技術是指以外參或內參為標準，通過對PCR終產物的分析或PCR過程的監測，進行PCR起始模板量的定量。 廣義概念下的定量PCR技術可以分為五種類型： （1）外參法+終產物分析。所謂“外
Azure－Cielo?實時熒光定量PCR系統在檢測單拷貝DNA的應用
介紹：Azure Cielo? 3和Cielo? 6 實時熒光定量PCR系統具有卓越的靈敏度。該系統配置新型的高性能光學系統，采用16組光纖單孔掃描設計，一根光纖用于高能LED激發，另一根用于光信號檢測，可16孔同時采集(圖1)。特殊的激發/發射方式保證單孔掃描時僅激發一個孔，光纖傳導也有效消除
基于量子點的單分子熒光示蹤技術揭示分子馬達的行走...
基于量子點的單分子熒光示蹤技術揭示分子馬達的行走機制在生物體內，分子馬達參與肌肉收縮、胞質運輸、DNA轉錄以及有絲分裂等一系列重要的生命活動。在執行上述功能過程中，分子馬達需要借助ATP水解釋放的能量，完成在細胞骨架上的特定運行軌跡。因此，關于分子馬達沿著細胞骨架的行走機制的研究，對于深刻認識分子馬
一文知曉PCR，定量PCR，數字PCR方法選擇
從1985年至今的30多年時間里，PCR分析經歷了三代技術的發展。diyi代傳統PCR技術，采用瓊脂糖凝膠電泳的方法對PCR產物進行定性分析。第二代熒光定量PCR技術，通過在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號的積累實時監控PCR進程，最后用Cq值對基因進行定量分析。第三代數字PCR技術，通過
熒光定量PCR技術的熒光定量PCR的方法
接下來我們就來了解一下熒光定量的主要方法，我們如何選擇合適的方法？熒光定量PCR所使用的熒光化學可分為兩種：熒光探針和熒光染料。而熒光定量 PCR 的方法相應的可分為特異類和非特異類兩類，特異性檢測方法是在PCR反應中利用標記熒光染料的基因特異寡核苷酸探針來檢測產物；而非特異性檢測方法是在在PCR反
基于－PCR－的－DNA－斑點印跡實驗
對于高通量的篩選，推薦使用幾個熱循環儀廠家提供的 96 孔或 384 孔 PCR 板，或者使用單個的管子。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。實驗方法原理dNTP ，PCR 緩沖液，聚合酶混合液，嵌套引物，LB-氨芐液體培養基，溶液NaOH，SSC，Tris-HCl，PCR
基于－PCR－的－DNA－斑點印跡實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 dNTP ，PCR 緩沖液，聚合酶混合液，嵌套引物，LB-氨芐液體培養基，溶液NaOH，SSC，Tris-HCl，PCR 產物微量滴定板，尼龍膜，紫外交聯裝置，96 孔或 384 孔復制器，熱循環儀，PCR 管或反應板
基于－PCR－的－DNA－斑點印跡實驗
實驗方法原理 dNTP ，PCR 緩沖液，聚合酶混合液，嵌套引物，LB-氨芐液體培養基，溶液NaOH，SSC，Tris-HCl，PCR 產物微量滴定板，尼龍膜，紫外交聯裝置，96 孔或 384 孔復制器，熱循環儀，PCR 管或反應板試劑、試劑盒 dNTP PCR 緩沖液聚合酶混合液嵌套引物LB-氨芐
microRNA的實時定量莖環RTPCR技術（四）
?圖5。對熱處理細胞，細胞裂解液和10 miRNA實時定量總RNA進行比較。用閾值循環（CT）來衡量miRNA的表達水平。每PCR擴增約400 HepG2細胞進行了分析。??圖6。的TaqMan miRNAmiR-16的分析比較來解決以印跡雜交為基礎的分析。總RNA來自小鼠腎，肝，肺，脾和睪丸組織。
佘永新：基于分子印跡技術的拉曼快速檢測研究進展
分析測試百科網訊 2020年9月22-23日，“第九屆中國食品與農產品安全檢測技術與質量控制國際論壇（簡稱 CFAS 2020）”在江蘇南京召開。大會第二日圍繞農獸藥殘留檢測、快速檢測、重金屬及元素檢測等食品安全話題展開交流。快速檢測技術專題論壇邀請了暨南大學石磊教授、國家飼料質量監督檢驗中心（
數字PCR技術的發展和原理
數字PCR即Digital PCR（dPCR)，它是一種核酸分子絕對定量技術。相較于qPCR，數字PCR可讓你能夠直接數出DNA分子的個數，是對起始樣品的絕對定量。在定量PCR時，我們常常糾結一個問題，究竟是相對定量還是絕對定量呢？如今，你無需糾結了，因為數字PCR（digital PCR）來了。盡
數字PCR技術的原理
PCR實際上是一個在模板DNA、引物(模板片段兩端的已知序列)和四種脫氧核苷酸等存在的情況下，DNA聚合酶依賴的酶促合成反應，擴增的特異性取決于引物與模板DNA的特異結合。
數字PCR技術的優勢
? ? 1.絕對的定量：不依賴于標準曲線和參照樣本，直接檢測目標序列的拷貝數。? ? 2.高靈敏度檢測：靈敏度高達0.01%，可以檢測含量極低的核酸序列（如CTDNA）。? ? 3.區分濃度差異微小的樣品：可以精準測定靶基因相對表達，基因拷貝數變異等。
知曉PCR，定量PCR與數字PCR的實驗方法與選擇
從1985年至今的30多年時間里，PCR分析經歷了三代技術的發展。一代傳統PCR技術，采用瓊脂糖凝膠電泳的方法對PCR產物進行定性分析。第二代熒光定量PCR技術，通過在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號的積累實時監控PCR進程，最后用Cq值對基因進行定量分析。第三代數字PCR技術，通過將PC
數字PCR技術在DNA甲基化檢測中的應用
DNA甲基化是目前研究最多的表觀遺傳修飾之一，發生于CpG二核苷酸序列C5位置的胞嘧啶上，多發生于CpG島上，研究發現，DNA甲基化參與調節多種細胞過程，包括胚胎發育，轉錄，X染色體失活，基因組印跡、染色體穩定性等。許多研究發現，DNA甲基化在一系列的疾病（如癌癥等）起到十分重要的作用。在癌癥患者中