【銳賽小課題】miRNA研究之動物總RNA的提取與電泳
動物總RNA的提取與電泳 I． 實驗目的與要求 A. 理解和掌握提取和純化動物總RNA的技術原理和操作方法。 B. 理解和掌握通過電泳鑒定提取所得的動物總RNA的技術原理和操作方法。 II． 實驗原理和背景知識 A. RNA是生命活動中基因表達過程非常重要的生物大分子，如mRNA,它攜帶了DNA的全部編碼信息。RNA的分離是研究基因功能的重要基礎之一，在分子生物學中占有重要的地位。提取的mRNA可用于Northern blot、RT-PCR、構建 cDNA文庫、Gene Chips以及體外翻譯等實驗。 B. 本次試驗中，由于RNase極穩定，所以，在操作RNA時，要格外仔細，以防RNA被降解。在提取RNA之前，必須對所用器皿進行RNase滅活處理。如用180oC干烤8小時以上處理玻璃器皿，或用0.1%的焦碳酸二乙酯(DEPC)的水溶液浸泡玻璃器皿和其它用品。所用水以及相關的緩沖液也需要......閱讀全文
【銳賽小課題】miRNA研究之動物總RNA的提取與電泳
動物總RNA的提取與電泳 I． 實驗目的與要求 A. 理解和掌握提取和純化動物總RNA的技術原理和操作方法。 B. 理解和掌握通過電泳鑒定提取所得的動物總RNA的技術原理和操作方法。 II． 實驗原理和背景知識 A. RNA是生命活動中基因表達過程非常重要的生物
miRNA研究之動物總RNA的提取與電泳
動物總RNA的提取與電泳I．實驗目的與要求A. 理解和掌握提取和純化動物總RNA的技術原理和操作方法。B. 理解和掌握通過電泳鑒定提取所得的動物總RNA的技術原理和操作方法。II． 實驗原理和背景知識A. RNA是生命活動中基因表達過程非常重要的生物大分子，如mRNA,它攜帶了DNA的全部編碼信息。
【銳賽小課堂】miRNA研究之RNA標記
RNA標記是將標記物（如放射性同位素、熒光素或酶）共價地連接到RNA，通過檢測標記物，進而實現對RNA鑒別和檢測的目的。RNA標記在分子探針領域應用廣泛，在疾病診斷方面也很有前景。 理想的RNA標記方法應符合以下要求： 1. 操作簡單，靈敏度高 2. 不影響堿基配對的特異性
miRNA研究之RNA提取試劑的選擇
RNA提取試劑的選擇RNA提取對于科研人員來說并不陌生，但是要得到好的結果卻不是一件很容易的事情。事實上，現在市面上的豐富的RNA提取試劑基本上可以滿足科研人員的需要，為什么往往提取的RNA卻容易失敗呢？RNA提取失敗的主要現象有三個：提取的RNA降解、提取的RNA量偏低以及提取的RNA純度低。究竟
【銳賽小課題】染色體分離實驗
一、聚胺法分離染色質 試劑、試劑盒：秋水仙胺、聚胺緩沖液 實驗步驟： 有絲分裂中細胞的同步化 1. 37℃，用合適的含有 FCS，抗生素和其他必要成分的培養基培養細胞。 2. 收集有絲分裂細胞前 10~16 小時在培養基中以 0.06 μg/ml 的
miRNA研究之RNA標記
RNA標記RNA標記是將標記物（如放射性同位素、熒光素或酶）共價地連接到RNA，通過檢測標記物，進而實現對RNA鑒別和檢測的目的。RNA標記在分子探針領域應用廣泛，在疾病診斷方面也很有前景。 理想的RNA標記方法應符合以下要求：1. ?操作簡單，靈敏度高2. ?不影響堿基配對的特異性3. ?不影響R
提取動物關節軟骨組織總RNA
實驗目的???????研磨破碎軟骨組織（大鼠膝關節軟骨），提取其總RNA。?實驗原理???????充分磨碎軟骨樣品（大鼠膝關節軟骨），再用相關試劑提取其總RNA。?實驗材料和器具樣品：大鼠膝關節軟骨儀器：多樣品組織研磨儀（上海凈信，Tissuelyser-24）耗材：研磨罐（上海凈信，***ml），
動物總RNA的提取及含量測定
一、實驗目的（1）了解制備RNA幾種方法的原理及優缺點（2）掌握稀堿法提取兔肝RNA的原理和操作技術二、實驗原理?細胞內大部份RNA均與蛋白質結合在一起，并且多以核蛋白的形式存在。因此，分離制備RNA時，首先遇到的是必須使RNA與蛋白解離，并除去蛋白質。由于RNA的種類來源和存在形式不同，所用的制備
【銳賽小課堂】WB生物樣本總蛋白抽提
銳賽小課堂1222-158 一、貼壁細胞蛋白提取 A 1..將水浴鍋的溫度調至100℃，等水浴鍋達到100℃溫度后，取出需要收樣的細胞的培養皿或者孔板。 2.將緩沖液（1Xloading buffer）置于100℃水浴鍋中預熱10min。 （loding buffe
動物RNA提取實驗——SV總RNA試劑盒提取法
動物RNA提取可用于：（1）研究生物體基因調控機制；（2）分子克隆和基因表達以獲得該性狀基因；（3）可以對特定的基因表達進行定量的檢測，從分子水平精確的了解細胞生命活動的規律。實驗方法原理SV Total RNA Isolation System (SV 總RNA 純化系統)可在1小時內從組織、培養
小分子RNA（miRNA）簡介
一、什么是小分子RNA（ MicroRNA）?? ? MicroRNA (miRNA) 是一類長度約為20-24個核苷酸長度的具有調控功能的非編碼RNA。 miRNA 主要參與基因轉錄后水平的調控。這些miRNA基因首先在細胞核內轉錄成原始miRNA轉錄本（primary transcrip
總RNA的提取
?完整RNA的提取和純化,是進行RNA方面的研究工作,如Nothern雜交、mRNA分離、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及體外翻譯等的前提。所有ＲＮＡ的提取過程中都有五個關鍵點，即１）：樣品細胞或組織的有效破碎；２），有效地使核蛋白復合體變性；３），對內源ＲＮＡ酶的有效抑制；４）有效地將ＲＮ
總RNA的提取
完整RNA 的提取和純化，是進行RNA 方面的研究工作，如Nothern雜交、mRNA 分離、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及體外翻譯等的前提。所有ＲＮＡ的提取過程中都有五個關鍵點，即１）：樣品細胞或組織的有效破碎；２），有效地使核蛋白復合體變性；３），對內源ＲＮＡ酶的有效抑制；４）
總RNA提取（Trizol提取）
在收集到生物材料之后，最好能即刻進行RNA 制備工作。若需暫時儲存，則應以液氮將生物材料急速冷凍后，儲存于-80℃冷凍柜。在制備RNA 時，將儲存于冷凍柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破細胞，不可以先行解凍，以避免RNase 的作用。1. 提取組織RNA 時，每50～100mg 組織用1ml
總RNA提取與Northern雜交（3）
第二天：將上述物品揭開，將膠正面朝下，膜正面朝上，用鉛筆作好標記。將膠浸泡在EB中1-2分鐘，用DEPC H2O清洗，將膜放在濾紙上面，夾好，4度下保存，或者直接進行預雜交。UV雜交（有助于RNA結合到膜上面）。五、預雜交和雜交預雜交和雜交 buffer： 100ul20×SSC 25ml （5×S
總RNA提取與Northern雜交（1）
一、 總RNA的提取1、 取組織10-50毫克，剪切成大小在0.5厘米以內的碎片，加入×5的RNA later（約2毫升）。樣品在37度可保存1天。室溫下1周，4度下1個月。2、 勻漿：用Rnase Erase spray（ICN）清理勻漿器頭部（7mm），用DEPC水和乙醇清洗，將上述樣品用鑷
總RNA提取與Northern雜交（2）
4、Loading buffer（10ul每個樣） ? 總體積 100ul 200 ul 500ul 10×MOPS
真核細胞總RNA的提取與鑒定
【原理】RNA的制備與分析對于了解基因表達在轉錄水平上的調節是必不可少的，也是最常使用的通過cDNA途徑分析細胞基因表達的前提。通常一個典型的哺乳動物細胞約含10-5μg RNA，但其中大部分為rRNA及由tRNA，而mRNA僅占1%～5%。雖然mRNA大小和序列各不相同，但在多數真核細胞mRNA的
植物總RNA的快速提取與純化
一、原理RNA包括rRNA、tRNA和mRNA等，大部分通常是以核蛋白復合物的形式存在的。通過SDS、苯酚處理使蛋白質變性并沉淀。利用LiCl溶解雙鏈DNA的特性去除DNA，經乙醇沉淀得到總RNA。純度高、完整性好的RNA，即可用于Northern雜交、純化mRNA、cDNA合成和體外翻譯等進一步的
真核細胞總RNA的提取與鑒定
【原理】RNA的制備與分析對于了解基因表達在轉錄水平上的調節是必不可少的,也是最常使用的通過cDNA途徑分析細胞基因表達的前提。通常一個典型的哺乳動物細胞約含10-5μg RNA，但其中大部分為rRNA及由tRNA，而mRNA僅占1%～5%。雖然mRNA大小和序列各不相同，但在多數真核細胞m
總RNA提取實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 一些公司推出的總RNA 提取試劑盒，可以用來制備高質量的可用于建庫的RNA 。該總RNA 純化系統采用兩種著名的RNA 酶抑制劑，異硫氰酸弧(GTC)和β-巰基乙醇，加上整個操作都在冰浴下進行，這樣就能顯著降低RNA 的
總RNA提取實驗
實驗方法原理 GTC和N-十二烷基肌氨酸鈉的聯合使用，將促使核蛋白復合體的解離，使RNA 與蛋白質分離，并將RNA 釋放到溶液中。而進一步從復合體中純化RNA ，則根據Chomc zynski和Sacchi的一步快速抽提法進行，采用酸性酚-氯仿混合液抽提。低pH值的酚將使RNA 進入水相
樣品總RNA的提取
實驗概要本實驗介紹了樣品總RNA的提取方法。完整RNA的提取和純化，是進行RNA方面的研究工作，如Nothern雜交、mRNA分離、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及體外翻譯等的前提。所有RNA的提取過程中都有五個關鍵點，即：樣品細胞或組織的有效破碎；有效地使核蛋白復合體變性；對內源RNA酶的
小麥總RNA的提取
實驗概要從黃化小麥苗中提取總RNA，可以為cDNA文庫的構建做好準備。實驗步驟1. 所有容器高溫滅菌兩次，DEPC高溫滅菌，所有的試劑用DEPC配制，高溫滅菌。2. 在一滅菌2mL管中加入：5mol/L異硫氰酸胍0.7mL、苯酚0.4mL、NaAc(pH4.0) 0.1mL。3. 稱取0.2g小麥黃
細胞總RNA的提取
提取細胞RNA的步驟：1)??六孔板每孔細胞中加入1ml Trizol，冰上放置5min，槍頭吹打。2)??將各孔裂解液吸到1.5 ml EP管中，加入氯仿0.2ml/管，用力振搖15s。15－30℃下孵育2-3min，離心（4℃，12，000g，15min）。3)??離心后液體分為三層（上層－無色
小麥總RNA的提取
實驗步驟1. 所有容器高溫滅菌兩次，DEPC高溫滅菌，所有的試劑用DEPC配制，高溫滅菌。2. 在一滅菌2mL管中加入：5mol/L異硫氰酸胍0.7mL、苯酚0.4mL、NaAc(pH4.0) 0.1mL。3. 稱取0.2g小麥黃化苗的葉片，迅速在液氮中研磨成粉末，轉入已準備好的離心管中，劇烈震蕩。
總RNA的提取（Trizol法提取）
在收集到生物材料之后，最好能即刻進行RNA制備工作。若需暫時儲存，則應以液氮將生物材料急速冷凍后，儲存于-80℃冷凍柜。在制備RNA時，將儲存于冷凍柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破細胞，不可以先行解凍，以避免RNase的作用。1.????? 提取組織RNA時，每50～100mg組織用1ml
動物RNA提取實驗
SV總RNA試劑盒提取法 Trizol試劑提取法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 SV Total RNA Isolation System (SV 總RNA
動物RNA提取實驗
實驗方法原理 SV Total RNA Isolation System (SV 總RNA 純化系統)可在1小時內從組織、培養細胞和白細胞中提取純化完整總RNA，方法簡單、快速。該系統以膜為基礎，根據組織類型的不同，每次最多可純化60 mg 組織。系統包含DNase 處理步驟，直接在小離
腫瘤細胞分泌的exo通過其包含的miR21促進轉移前表型
銳博生物：教科書般的外泌體miRNA研究案例 近日，四川腫瘤醫院的朱桂全老師在Cancer Research發表了一篇研究外泌體miRNA與癌癥的文章。小編認為該研究的思路對廣大外泌體研究者具有很好的參考作用，所以今天給大家帶來這篇文章的詳細解讀。 1、首先，提取exo 方法：