RNA干涉(RNAInterference，RNAi)（1）
基因沉默（gene silencing）是生物體內特定基因由于種種原因不表達的遺傳現象。一方面，基因沉默是生物遺傳操作創造新的遺傳修飾生物（genetically modified organisms）的障礙，另一方面，它又是植物抵抗外來核酸入侵（如病毒）的一種反應，為植物抗病毒的遺傳育種提供了具有實用價值的策略：RNA 介導的病毒抗性（RNA mediated virus resistance, RMVR）。近年來，在不同的研究領域和生物中發現了許多新的使基因關閉或沉默的類型，并賦予其不同的名稱：在植物中稱為RNA 共抑制(co-suppression)，在真菌中叫RNA 壓制(quelling)，動物中則叫RNA干涉(interference)。RNA干涉是指短的dsRNA 可以降解內源的同源RNA,，而使相應基因沉默的現象，簡稱RNAi。1995年，康乃爾大學 Su Guo博士，于試圖阻斷線......閱讀全文
RNA干涉(RNA－Interference，RNAi)（1）
基因沉默（gene silencing）是生物體內特定基因由于種種原因不表達的遺傳現象。一方面，基因沉默是生物遺傳操作創造新的遺傳修飾生物（genetically modified organisms）的障礙，另一方面，它又是植物抵抗外來核酸入侵（如病毒）的一種反應，為植物抗病毒的遺傳育
RNA干涉(RNA－Interference，RNAi)（2）
早期的 RNAi 技術可用在研究與胚胎發育相關基因的功能上，但是由于細胞分裂造成 dsRNA 的稀釋，使得這種方法在研究成體的基因功能時有一定的局限性。為彌補早期 RNAi 技術的不足，Tavernarakis 等將 RNAi 技術做了一些改進及更動，將目的基因之標的序列以反向重復的方式，由
RNA干擾（RNA－interference，RNAi）基礎知識(1)
Rnai最近由于RNA 干擾（RNA interference，RNA i）的發現使反義領域的研究增多。這種自然發生的現象最早是在秀麗線蟲中發現的（1），是序列特異性地使轉錄后的基因沉默的有力機制。由于最近兩年在 RNA i領域取得的進步，已經有許多這方面的綜述發表（2-4）。RNA 干擾是
RNA干擾技術(RNA－interference，RNAi)
1995年，康乃爾大學的Su Guo博士在試圖阻斷秀麗新小桿線蟲（C. elegans）中的par-1基因時，發現了一個意想不到的現象。她們本是利用反義RNA技術特異性地阻斷上述基因的表達，而同時在對照實驗中給線蟲注射正義RNA（sense RNA）以期觀察到基因表達的增強。但得到的結果
反義技術——RNA干擾（RNA－interference，RNAi）
最近由于RNA干擾（RNA interference，RNAi）的發現使反義領域的研究增多。這種自然發生的現象最早是在秀麗線蟲中發現的（1），是序列特異性地使轉錄后的基因沉默的有力機制。由于最近兩年在RNAi領域取得的進步，已經有許多這方面的綜述發表（2-4）。RNA干擾是由長的雙鏈 RNA
Rules－of－siRNA－design－for－RNA－interference－(RNAi)
General GuidelinessiRNA targeted sequence is usually 21 nt in length.Avoid regions within 50-100 bp of the start codon and the termination codonAvoid
RNA干擾（RNA－interference，RNAi）基礎知識(2)
1RNA i的發現RNA i是在研究秀麗新小桿線蟲（C. elegans）反義RNA （antisenseRNA ）的過程中發現的，由dsRNA 介導的同源RNA 降解過程。1995年，Guo等發現注射正義RNA （senseRNA ）和反義RNA 均能有效并特異性地抑制秀麗新小桿線蟲par
RNA干擾（RNA－interference，RNAi）基礎知識(3)
SiRNASmall interfering RNA (siRNA)：是一種小RNA分子（~21-25核苷酸），由Dicer（RNAase Ⅲ家族中對雙鏈RNA具有特異性的酶）加工而成。SiRNA是siRISC的主要成員，激發與之互補的目標mRNA的沉默。ShRNAshRNA 短發夾RNAshRNA
哺乳動物RNAi技術－Mammalian－RNA－Interference
Mammalian RNA InterferenceThomas TuschlLaboratory for RNA Molecular BiologyThe Rockefeller University, New York?Excerpted from?RNAi: A Guide To Gene S
RNA干涉實驗
RNA 干涉（RNA1） 是指在真核細胞中引入雙鏈 RNA ( doubt-stranded RNA，dsRNA ) 分子從而導致具有序列同源性的基因產生特異件基內沉默（gene silencing ) 的現象。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編：鄭曉飛。實驗方法原理當確定了靶基因上的 siRN
RNA干涉實驗
實驗方法原理 當確定了靶基因上的 siRNA 分子作用位點以后，根據靶位點的序列可以很方便地推導得到相應的 siRNA 分子的正義與反義 RNA 鏈序列。它們包含 19 bp 的互補雙鏈區和兩側的不配對區（每側為 2 個 U 成 2 個 T )，在合成時用 T 替代 U 可以降低成本并可以提
RNA干涉實驗
化學合成siRNA分子實驗 體外轉錄合成siRNA分子實驗 采用RNA聚合酶Ⅲ啟動子表達siRNA分子 采用RNaseⅢ制備siRNA分子實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗方法
RNA干擾（RNAi）實驗原理與方法（1）
近年來的研究表明，將與mRNA對應的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導入細胞，可以使mRNA發生特異性的降解，導致其相應的基因沉默。這種轉錄后基因沉默機制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被稱為RNA干擾（RNAi）。一、R
RNAi——雙鏈RNA引起的基因敲除（1）
1995年，康奈爾大學的Su Guo博士用反義RNA阻斷線蟲基因表達的試驗中發現，反義和正義RNA都阻斷了基因的表達，他們對這個結果百思不得其解。直到1998年， Andrew Fire的研究證明，在正義RNA也阻斷了基因表達的試驗中，真正起作用的是雙鏈RNA[1]。這些雙鏈RNA是體外
RNA干擾RNAi的生物特性
RNAi抑制轉座子活性兩方面的證據提示轉座子活性的抑制與siRNA有關① 發現蠕蟲mut-7 基因參與RNAi 并且與轉座子的轉座抑制有關；② 在果蠅中，參與RNAi 的RNA 解螺旋酶Spindle-E 的突變將導致該基因引起的基因沉默的缺失，同時提高了反轉錄轉座子活性。RNAi抵御病毒感染在擬南
RNAi（RNA干擾）的分子機制
通過生化和遺傳學研究表明，RNA干擾包括起始階段和效應階段(inititation and effector steps)。在起始階段，加入的小分子RNA被切割為21-23核苷酸長的小分子干擾RNA片段(small interfering RNAs, siRNAs)。證據表明；一個稱為Dic
RNA干擾（RNAi）實驗成功要素
基因和siRNA選擇RNAi實驗的通量可從沉默單個感興趣的基因，到少量相關基因或同一個通路上的基因，到全基因組高通量篩選，取決于需要解決的生物學問題。siRNA的設計至關重要。轉染優化用于RNAi實驗的細胞應當有效轉染siRNA。轉染必須經過優化確保siRNA的濃度是最低的有效濃度以避免非特異性效應
RNA干擾（RNAi）實驗原理與方法（3）
3.DEAE-葡聚糖和polybrene帶正電的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚體復合物和帶負電的DNA分子使得DNA可以結合在細胞表面。通過使用DMSO或甘油獲得的滲透休克將DNA復合體導入。兩種試劑都已成功用于轉染。DEAE-葡聚糖僅限于瞬時轉染。4.機械法轉染技術也包括使用機械的方法，
RNA干擾（RNAi）實驗原理與方法（2）
dsRNA消化法的主要優點在于可以跳過檢測和篩選有效siRNA序列的步驟，為研究人員節省時間和金錢（注意：通常用RNAse III通常比用Dicer要便宜）。不過這種方法的缺點也很明顯，就是有可能引發非特異的基因沉默，特別是同源或者是密切相關的基因。現在多數的研究顯示這種情況通常不會造成影響。最
RNAi制備小分子干擾RNA（small－interfering－RNAs，siRNAs)的方法1
最適用于：快速而經濟地研究某個基因功能缺失的表型不適用于：長時間的研究項目，或者是需要一個特定的siRNA進行研究，特別是基因治療體內表達前面的3種方法主要都是體外制備siRNAs，并且需要專門的RNA轉染試劑將siRNAs轉到細胞內。而采用siRNA表達載體和基于PCR的表達框架則屬于：從轉染到細
Nature子刊：增強RNA干涉的效力
人們可以通過納米顆粒將短鏈RNA運輸到目標細胞，關閉功能發生異常的基因，從而治療癌癥和其他疾病。不過迄今為止，科學家們還不完全了解，納米顆粒進入細胞后發生的情況。 現在，麻省理工MIT的一項新研究展現了這些納米顆粒的命運，這一發現能幫助人們大大提高siRNA的運輸效率。文章于六月二十三日發
RNA干涉實驗——采用RNA聚合酶Ⅲ啟動子表達siRNA分子
實驗方法原理因為哺乳動物細胞不具備低等真核生物細胞所具有的擴增 RNAi 信號的機制，因此人工合成或體外轉錄的 siRNA 分子在細胞內的作用是瞬時性的，不適合用于進行靶基因的表達受到抑制后細胞表型的長期變化觀察，也不適于進行文庫的篩選。此外，體外制備 siRNA 分子的成本比較高，而且 siRNA
RNAi術語表
RNAi GlossaryDicer?- Dicer is a member of the RNase III family of nucleases that specifically cleave double-stranded RNAs. Dicer processes long dsRNA
RNAi相關的名詞解釋[英文]
Argonaute?- A family of proteins containing multiple domains and involved in RNA interference (RNAi). Argonatue is the main component of RNAi effector
RNAi——雙鏈RNA引起的基因敲除（2）
在構建雙鏈RNA的表達載體時，使用RNA多聚酶Ⅲ來指導RNA的合成。這是因為RNA多聚酶Ⅲ有明確的啟始和終止序列，而且合成出的RNA不會帶有polyA尾。當RNA多聚酶Ⅲ遇到連續5個胸腺嘧啶時，它指導的轉錄就會終止，并且轉錄產物在第二個尿嘧啶處被切下來。U6啟動子能被RNA多聚酶Ⅲ識別， 合
RNAi技術專有名詞(1)
1.RNAi：（RNA interference）RNA干擾 一些小的雙鏈RNA可以高效、特異的阻斷體內特定基因表達，促使mRNA降解，誘使細胞表現出特定基因缺失的表型，稱為RNA干擾（RNA interference，RNAi，也譯作RNA干預或者干涉）。它也是體內抵御外在感染的一種重要保護機
真核細胞總RNA的制備（Total－RNA－Isolation）1
從細胞中分離RNA的純度于完整性對于許多分子生物學實驗至關重要。如Northern印跡與雜交分析、寡聚（dT）纖維素選擇分離 mRNA，cDNA合成及體外翻譯等實驗的成敗，在很大程度上決定于RNA的質量。RNA分離的最關鍵因素是盡量減少RNA酶的污染。快速一步法提取總RNA組織及有核細胞在勻漿過程中
RNAi實驗中雙鏈短RNA（dsRNA）制備過程
RNAi 實驗中雙鏈短RNA（dsRNA）制備過程，本實驗方法來自于加州大學Jim教授實驗，很權威！Procedure for the Generation of dsRNA for use in RNAi1.?Design polymerase chain reaction (PCR ) prim
micro－RNA(miRNA)綜述1
RNA一度被認為僅僅是DNA和蛋白質之間的“過渡”，但越來越多的證據清楚的表明，RNA在生命的進程中扮演的角色遠比RNA我們早前設想的更為重要。RNA干擾（RNA interference）的發現使得人們對RNA調控基因表達的功能有了全新的認識，更因為可以簡化替代基因敲除而成為研究基因功能的
RNAi原理圖解
The Mechanism of RNA Interference (RNAi)Long double-stranded RNAs (dsRNAs; typically >200 nt) can be used to silence the expression of target genes in