southern印跡雜交的方法步驟
以哺乳動物基因組DNA為例，介紹Southern印跡雜交的基本步驟。一、 待測核酸樣品的制備（一）制備待測DNA基因組DNA是從動物組織（或）細胞制備。1.采用適當的化學試劑裂解細胞，或者用組織勻漿器研磨破碎組織中的細胞；2.用蛋白酶和RNA酶消化大部分蛋白質和RNA；3.用有機試劑（酚/氯仿）抽提方法去除蛋白質。（二） DNA限制酶消化基因組DNA很長，需要將其切割成大小不同的片段之后才能用于雜交分析，通常用限制酶消化DNA。一般選擇一種限制酶來切割DNA分子，但有時為了某些特殊的目的，分別用不同的限制酶消化基因組DNA。切割DNA的條件可根據不同目的設定，有時可采用部分和充分消化相結合的方法獲得一些具有交叉順序的DNA片段。消化DNA后，加入EDTA，65℃加熱滅活限制酶,樣品即可直接進行電泳分離，必要時可進行乙醇沉淀，濃縮DNA樣品后再進行電泳分離。二、 瓊脂糖凝膠電泳分離待測DNA樣品（一）基本原理Southern印跡雜......閱讀全文
SOUTHERN－BLOTTING
Materials:Whatman 3 mm Blotting Papernitrocellulose (Schleicher & Schuell, Amersham) or nylon membrane filter (Amersham).Paper towels (preferably C-fo
Southern－Blot
1. Run gel (0.8 -1.0% agarose is best). For yeast chromosomal Southerns, digest 20 μg DNA. Use 50 ml minigel for most purposes. Photograph gel, but mi
Southern雜交
?? Southern雜交可用來檢測經限制性內切酶切割后的DNA片段中是否存在與探針同源的序列,它包括下列步驟: (1) 酶切DNA, 凝膠電泳分離各酶切片段,然后使DNA原位變性。? (2) 將DNA片段轉移到固體支持物(硝酸纖維素濾膜或尼龍膜)上。? (3) 預雜交濾膜,掩蓋濾膜上非特異性
Southern雜交
實驗概要本實驗介紹了Southern雜交的基本流程。主要試劑細菌基因組DNA抽提試劑盒，限制性內切酶，變性溶液，中和溶液，10 X SSC，雜交緩沖液(200mM磷酸鈉緩沖液，PH7.2，1 mM EDTA，50%甲酞胺，1% BSA，7% SDS)，隨機引物標記試劑盒，洗脫緩沖液(2 X SSC，
Genomic－Southern－Blot
SolutionsProtocol:Digest 5-10 μg genomic DNA overnight with restriction enzyme of choice.Run digested gDNA on 0.8% TAE gel with marker (with no ethidi
Southern－印跡實驗
實驗方法原理?本方案是專門為將瓊脂糖凝膠印跡至不帶電荷或帶正電荷的尼龍膜上而設計的，稍作修改后同樣可用于硝酸纖維素膜方法。實驗材料?DNA試劑、試劑盒?HClNaClTrisNaOHSSC溴化乙錠儀器、耗材?電泳儀紫外透射儀實驗步驟 一、向上毛細管轉移法的轉移疊層系統：：圖一、向上毛細管轉移法的轉移
Southern－雜交鑒定
1）??取10ul待測DNA，于一定濃度的瓊脂糖凝膠上進行電泳。(20mL,1.0%凝膠,)2) 凝膠用溴化乙錠染色，切掉凝膠四周多余部分，并在凝膠的一角作一記號, 拍照記錄電泳結果(拍照時, 凝膠旁放一尺子)。3) 雜交用膠的制備 (做以下步驟兩組合一)A．??將凝膠浸沒入30mL 0.25mol
Southern雜交技術
?SOUTHERN BLOT1. Run the gel as normal. Often for genomic southerns it is desirable to run long gels (18cm) over 4-6hrs.2. Photograph the gel with a r
Southern－Blots－技術
Southern Blot Flow一 基因組酶切和電泳在200 μl 微量離心管中加入：25 μl DNA樣品(約10μg)，3μl 限制性內切酶（MBI，10 U/ μl）5 μl 相應的10×buffer，補水到50μl。然后加一滴礦物油覆蓋, 稍微離心后放于37℃水浴8-12小時。酶切完后，
Southern－blot實驗
實驗方法原理?互補的核苷酸序列通過Walson-Crick堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的，可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA，也可以是細胞總DNA 或總RN
Southern－blot實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下，可按堿基互補的原則特異性地雜交形成雙鏈。利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段轉移至尼龍膜或其他固相支持物上，經干烤或者紫外線
Southern印跡技術
實驗原理:Southern印跡是將DNA片斷從電泳凝膠上直接轉移至膜支持物（如硝酸纖維素膜、尼龍膜）上，使DNA片斷固定的技術。先將DNA經限制性內切酶消化成一系列片段，進行瓊脂糖凝膠電泳，各片段因分子量不同而彼此分開，然后經堿處理凝膠，使DNA的片段被變性、中和并通過毛細作用在高鹽緩沖液中在原位將
Southern－印跡實驗
印跡法 堿性緩沖液法 向下毛細管轉移法 電轉印法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本方案是專門為將瓊脂糖凝膠印跡至不帶電荷或帶正電荷的尼龍膜上而設
Southern雜交步驟
Southern雜交可用來檢測經限制性內切酶切割后的DNA片段中是否存在與探針同源的序列,它包括下列步驟:(1) 酶切DNA, 凝膠電泳分離各酶切片段,然后使DNA原位變性。(2) 將DNA片段轉移到固體支持物(硝酸纖維素濾膜或尼龍膜)上。(3)?預雜交濾膜,掩蓋濾膜上非特異性位點。(4) 讓探針與
Southern－blot實驗
Southern blot可應用于：（1）檢測重組DNA；（2）分析DNA樣品中是否有與探針序列同源的DNA片段；（3）驗證檢測片段的分子量大小。實驗方法原理具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下，可按堿基互補的原則特異性地雜交形成雙鏈。利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠
Genomic－Southern－Blot－Analysis
This chapter describes a detailed protocol for genomic Southern blot analysis which can be used to detect transgene or endogenous gene sequences
Southern－Blotting:－DNA－Transfer
Southern Blotting: DNA Transfer 1. Depurination of DNA fragments: Wash gel in 0.25 M HCl 5' (small gels), 7' (large gels) 2. Denaturation: Wash gel
SOUTHERN－BLOT的步驟
1. Run the gel as normal. Often for genomic southerns it is desirable to run long gels (18cm) over 4-6hrs.2. Photograph the gel with a ruler adjacent
Southern－轉印分析
在膠體中的DNA 可利用毛細現象的作用將DNA 牽引轉印至覆蓋在膠片上的濾膜，經烘烤或UV 照射后，可使DNA 固定在膜上，以進行探針的雜合（hybridization） 反應。儀器用具：玻璃缸；玻璃板或吸水海綿；Crosslinker （Stratalinker 1800, Stratagene）
Southern－雜交技術2
三：操作(一)轉膜1電泳2切膠 在紫外下，切取凝膠有條帶部分3脫嘌啉0.25NHCL浸泡凝膠10分鐘，蒸餾水洗膠（大于15kb的DNA片段轉移時做此步驟）4變性，變性液（0.5MNaOH、1.5MNaCL）浸泡凝膠2次，每次15分鐘，蒸餾水洗膠5中和,中和液（0.5Mtris-HCL,pH7.0、3
Southern雜交實驗1
[實驗原理] Southern 雜交是分子生物學的經典實驗方法。其基本原理是將待檢測的DNA樣品固定在固相載體上，與標記的核酸探針進行雜交，在與探針有同源序列的固相DNA的位置上顯示出雜交信號。通過Southern雜交可以判斷被檢測的DNA樣品中是否有與探針同源的片段以及該片段的長度。
Southern雜交實驗2
③轉移按凝膠的大小剪裁NC膜或尼龍膜并剪去一角作為標記，水浸濕后，浸入轉移液中5min。剪一張比膜稍寬的長條Whatman 3mm濾紙作為鹽橋，再按凝膠的尺寸剪3-5張濾紙和大量的紙巾備用。按下圖所示進行轉移。（轉移過程一般需要8-24hr，每隔數hr換掉已經濕掉的紙巾。轉移液用20×SSC。注
Southern－blot雜交鑒定
1）取10ul待測DNA，于一定濃度的瓊脂糖凝膠上進行電泳。(20mL,1.0%凝膠,)2) 凝膠用溴化乙錠染色，切掉凝膠四周多余部分，并在凝膠的一角作一記號, 拍照記錄電泳結果(拍照時, 凝膠旁放一尺子)。3) 雜交用膠的制備 (做以下步驟兩組合一)A.將凝膠浸沒入30mL 0.25mol/L H
Southern－雜交技術1
Southern技術是指以Southern名字命名的DNA轉移雜交技術。它可用于基因組特定DNA序列的定位，可以測定相關片段的同源性、可以從c庫、基因組文庫中篩選完整基因等。用一種或多種限制性內切酶對基因組DNA加以切割，通過瓊脂糖凝膠電泳分離酶切片段，隨后，使DNA在原位變性，并從凝膠轉移至固相膜
Southern轉膜方法
Southern轉膜方法（毛細管虹吸印跡法、電轉移法與真空轉移法）將凝膠中的DNA進行堿變性并將pH值恢復至中性后，即可將凝膠中的DNA片段轉移到固相支持物上。用于轉膜的固相支持物有多種，包括硝酸纖維素濾膜(NCM)、尼龍膜、化學活性膜和濾紙等，Southern轉膜時可根據需要選擇不同的固相支持物用
Southern印跡雜交
?實驗原理核酸分子雜交技術是分子生物學領域中zui常用的具體方法之一。其基本原理是：具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下，可按堿基互補的原則形成雙鏈，此雜交過程是高度特異的。由于核酸分子的高度特異性及檢測方法的靈敏性，綜合凝膠電泳和核酸內切限制酶分析的結果，便可繪制出DNA分子的限制圖譜。但為
Screen－ES－cells－by－Southern－Blot
Digest DNA in 96-well plate To each well add: 4ul 10Xbuffer 4ul Enzyme 0.4ul Spermidine(0.4M) 31.6ul H2O 37?C 19h, then add 4ul loading dye to each w
DNA（基因）檢測－Southern－Blot
DNA（基因）檢測－Southern BlotDNA吸印轉移1．室溫下將電泳后的瓊脂糖凝膠浸入500ml溶液A中，搖動30分鐘后換500ml新鮮溶液A再搖30分鐘，使DNA雙鏈堿變性。溶液A：5M NaCl?????300.0ml10M NaOH????50.0mlH2O?????????650.0
Southern－印跡實驗——印跡法
Southern印跡法是將DNA片段從電泳凝膠中轉移至膜支持物上，使DNA片段固定，因此該膜半永久性地重現出凝膠電泳的帶型。實驗方法原理本方案是專門為將瓊脂糖凝膠印跡至不帶電荷或帶正電荷的尼龍膜上而設計的，稍作修改后同樣可用于硝酸纖維素膜方法。實驗材料DNA試劑、試劑盒HClNaClTrisNaOH
southern雜交分析的作用
由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性，它已成為分子生物學中最常用的基本技術，被廣泛應用于基因克隆的篩選，酶切圖譜的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下（適宜的溫室度及離子強度等）可按堿基互補原成雙鏈。雜交的雙方是待測核酸序