DNA片段回收與純化
質粒、噬菌體等經酶切，電泳；PCR產物經電泳后，常常需要對一些DNA電泳片段進行回收和純化，用于亞克隆、探針標記等。DNA回收和純化常用方法有壓碎法、低融點瓊脂糖法、凍融法等，也有現成的試劑盒供應。一、凍融法1. 紫外燈下仔細切下含待回收DNA的膠條，將切下的膠條（小于0.6g）搗碎，置于1.5ml離心管中；2. 加入等體積的Tris-HCl飽和酚（pH 7.6），振蕩混勻；3. -20℃放置5-10min；4. 4℃離心10000g×5min，上層液轉移置另一離心管中；5. 加入1/4體積H2O于含膠的離心管中，振蕩混勻；6. -20℃，放置5-10min；7. 4℃離心10000g×5min，合并上清液；8. &nb......閱讀全文
DNA片段回收與純化
????質粒、噬菌體等經酶切，電泳；PCR產物經電泳后，常常需要對一些DNA電泳片段進行回收和純化，用于亞克隆、探針標記等。DNA回收和純化常用方法有壓碎法、低融點瓊脂糖法、凍融法等，也有現成的試劑盒供應。一、凍融法1.??紫外燈下仔細切下含待回收DNA的膠條，將切下的膠條（小于0.6g）搗碎，置于
DNA小片段的純化回收
DNA 電泳小于100bp的片斷通常在電泳時就比較難觀察分辨，需要用分辨率很高的瓊脂糖或者丙烯酰胺凝膠。比如Cambrex的NuSieve 3:1或者GTG，或者是大名鼎鼎的MetaPhor瓊脂糖。所以實際上對于小片斷，可以分為兩種情況：一個是真的要回收電泳中特別小的片斷，這種情況我們前面有提到，比
DNA片段純化與回收常見問題分析
Q：利用凝膠回收試劑盒DNA回收效率較低或者未回收到目的片段？A：可能有以下幾個原因：? ?1. 膠塊未完全溶解，可適當延長水浴時間，并增加上下顛倒次數輔助溶解；? ?2. 膠塊體積太大，應先將其切為小塊，分多次回收；? ?3. 電泳緩沖液pH太高，硅基質膜在高鹽低pH結合DNA，如pH太高，應作適
DNA片段的回收實驗
樹脂回收法 微量柱法 液氮凍融法 常規方法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本方法特別適合于PCR片段的回收，具有純度高、操作簡潔等特點，經此方法
DNA片段的回收實驗
實驗方法原理 本方法特別適合于PCR片段的回收，具有純度高、操作簡潔等特點，經此方法回收的片段可有效的用于重組載體構建。通過15分鐘的純化過程，PCR產物即能被有效地從含引物二聚體、非特異性擴增引物片斷等混合物中分離出來，成為高度無鹽的、不含其他大分子成分的純化片斷。在較寬的分子量范圍內有較高的回收
DNA片段的回收實驗——樹脂回收法
目的DNA片段的回收技術是重組DNA中的關鍵技術，回收是指從電泳介質中純化出目的片斷。實驗方法原理本方法特別適合于PCR片段的回收，具有純度高、操作簡潔等特點，經此方法回收的片段可有效的用于重組載體構建。通過15分鐘的純化過程，PCR產物即能被有效地從含引物二聚體、非特異性擴增引物片斷等混合物中分離
凍融法回收DNA片段
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 凍融法是指采用反復冷凍與融化時由于細胞中形成了冰晶及剩余液體中鹽濃度的增高可以使細胞破裂。這種方法簡單方便，但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質不宜采用此法。? 實驗材料
凍融法回收DNA片段
凍融法回收DNA片段可用于：（1）獲取純化的DNA片段；（2）回收PCR產物。實驗方法原理凍融法是指采用反復冷凍與融化時由于細胞中形成了冰晶及剩余液體中鹽濃度的增高可以使細胞破裂。這種方法簡單方便，但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質不宜采用此法。?實驗材料DNA膠條試劑、試劑盒Tris-HCl飽和酚
膠回收、DNA片段純化常見問題分析及其解決方案
膠回收、DNA片段純化常見問題分析及其解決方案
基因組DNA的純化與回收
實驗概要質粒、噬菌體等經酶切，電泳；PCR產物經電泳后，常常需要對一些DNA電泳片段進行回收和純化，用于亞克隆、探針標記、測序等。DNA回收和純化常用方法有壓碎法、低融點瓊脂糖法、凍融法等，也有現成的試劑盒供應。主要試劑酚、氯仿、NaAc、無水乙醇、TE、Tris-HCl飽和酚、異丙醇、低融點瓊脂糖
微量柱法純化DNA片段
實驗概要目的DNA片段的回收技術是重組DNA中的關鍵技術，回收是指從電泳介質中純化出目的片斷。目前待回收的片斷主要有酶切片斷和各種PCR片斷；回收的介質主要有瓊脂糖和PAGE；回收的方法主要有樹脂回收、微量柱回收、玻璃奶回收、液氮凍凍融回收及透析袋大量回收等，下面分別介紹樹脂、微量柱及液氮凍凍融回收
DNA片段的回收實驗——常規方法
實驗材料NA片段試劑、試劑盒純化試劑盒異丙醇儀器、耗材離心機電泳儀電泳槽取液器微量真空裝置抽濾裝置實驗步驟1. ?PAGE電泳，如EB染色的則在紫外燈下切下目的片斷，如齦染或其他非放染色的則在關下切下目的片斷。2. ?用少量脫緩沖液I將目的片斷膠條洗至一Eppendorf管中，用玻棒將凝膠搗碎，用1
DNA純化實驗——DNA凝膠回收試劑盒純化法
DNA純化可用于：（1）獲得高純度的DNA；（2）濃縮DNA；（3）測序、遺傳信息分析等分子生物學應用。實驗方法原理本試劑盒適合從各種瓊脂糖凝膠中提取多至 8 μg DNA（70 bp-10 Kb），回收率為 60-85%。瓊脂糖凝膠在溫和的緩沖液(DE-A 溶液)中溶解，其中的保護劑能防止線狀 D
DNA片段的回收實驗——微量柱法
實驗材料DNA片段試劑、試劑盒純化試劑盒異丙醇儀器、耗材離心機電泳儀電泳槽取液器微量真空裝置抽濾裝置實驗步驟1. ?紫外燈下從膠上切下目的片段，放入一Epphendof管中。2. ?離心管在－20℃冷卻5~10分鐘。3. ?將微量柱下套上一Epphendof管，將冷卻的膠條裝進微量柱中，4℃12 0
直接從PCR產物回收純化DNA
1)直接加90-100μl純化緩沖液于1.5ml離心管，再加入30～300μl PCR反應物，Vortex混合；2)加入1ml樹脂輕輕Vortex 3次，每次間隔1分鐘；3)將取出拉桿的注射器筒（3ml）裝在純化柱上，加入上述DNA與樹脂混合液，然后裝上拉桿，慢慢將混合液推進純化柱內；4)卸下注射器
脈沖場凝膠中濃縮DNA片段的回收
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 低熔點瓊脂糖切片中的 DNA 首先通過電泳濃縮進入高百分比瓊脂糖凝膠中，然后用瓊脂糖酶處理而分離。最終 DNA 制備通過微透析純化。這種方法在把分離的 DNA 注入小鼠受精卵（Schedl et al. 1993) 或轉染鼠
脈沖場凝膠中濃縮DNA片段的回收
實驗方法原理 低熔點瓊脂糖切片中的 DNA 首先通過電泳濃縮進入高百分比瓊脂糖凝膠中，然后用瓊脂糖酶處理而分離。最終 DNA 制備通過微透析純化。這種方法在把分離的 DNA 注入小鼠受精卵（Schedl et al. 1993) 或轉染鼠胚胎干細胞（Choi et al. 1993) 時是非
脈沖場凝膠中濃縮DNA片段的回收
低熔點瓊脂糖切片中的 DNA 首先通過電泳濃縮進入高百分比瓊脂糖凝膠中，然后用瓊脂糖酶處理而分離。最終 DNA 制備通過微透析純化。這種方法在把分離的 DNA 注入小鼠受精卵（Schedl et al. 1993) 或轉染鼠胚胎干細胞（Choi et al. 1993) 時是非常有效的。本實驗來源「
DNA片段的回收實驗——液氮凍融法
實驗材料DNA片段試劑、試劑盒純化試劑盒異丙醇儀器、耗材離心機電泳儀電泳槽取液器微量真空裝置抽濾裝置實驗步驟1. ?紫外燈下從膠上切下目的片段，放入一Epphendof管中。2. ?離心1 min，加入500 ul TE，200 ul 酚/氯仿混勻。3. ?離心管放入液氮中10~15 min，再室溫
脈沖場凝膠中DNA片段的直接回收
實驗方法原理 低熔點瓊脂糖制備規模的 PFGE 經常被用于 DNA 片段的分離。不同大小的 DNA 可以用限制酶酶切產生高分辨率酶切圖譜或產生用于插入噬菌體或質粒載體的片段。實驗材料 DNA 大小標準基因組 DNA試劑、試劑盒 溴化乙錠酚：氯仿儀器、耗材 水浴實驗步驟 一、材料1. 緩沖液和溶液溴化
脈沖場凝膠中DNA片段的直接回收
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 低熔點瓊脂糖制備規模的 PFGE 經常被用于 DNA 片段的分離。不同大小的 DNA 可以用限制酶酶切產生高分辨率酶切圖譜或產生用于插入噬菌體或質粒載體的片段。 實驗材料
脈沖場凝膠中DNA片段的直接回收
低熔點瓊脂糖制備規模的 PFGE 經常被用于 DNA 片段的分離。不同大小的 DNA 可以用限制酶酶切產生高分辨率酶切圖譜或產生用于插入噬菌體或質粒載體的片段。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理低熔點瓊脂糖制備規模的 PFGE 經常被用于 DNA 片段的分離。不同大小的 D
DNA片段的膠回收方法和注意事項
DNA片段的膠回收方法電泳洗脫法低熔點瓊脂糖凝膠電泳挖塊法凍融回收法玻璃奶回收法柱回收法膠回收注意事項將電泳槽用ddH2O反復清洗干凈，倒入新鮮配制的滅菌電泳緩沖液；根據點樣量制備合適厚度的瓊脂糖凝膠板；切膠時盡可能切掉不含DNA片段的凝膠；要盡量減少DNA在紫外下的照射時間以減少對DNA的損傷；熔
從瓊脂糖凝膠(Agaros－gel)中回收DNA片段
實驗概要學會從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段的基本技術。實驗原理限制性內切酶切割后的DNA片斷經過電泳后，按分子量大小被分開，排列在瓊脂糖凝膠中，可以將特定的某條DNA帶所在的凝膠切下來，加熱或用特殊的試劑熔解凝膠，使DNA溶回到溶液中，再經過乙醇沉淀或過柱即可獲得目的 DNA酶切片段。主要試劑1. 電
從瓊脂糖凝膠（Agaros－gel）中回收DNA片段
實驗原理限制性內切酶切割后的DNA片斷經過電泳后，按分子量大小被分開，排列在瓊脂糖凝膠中，可以將特定的某條DNA帶所在的凝膠切下來，加熱或用特殊的試劑熔解凝膠，使DNA溶回到溶液中，再經過乙醇沉淀或過柱即可獲得目的 DNA酶切片段。實驗試劑1. 電泳緩沖液2. 熒光染料3. 電泳級瓊脂糖粉4. 10
從瓊脂糖凝膠(Agaros－gel)中回收DNA片段
目的學會從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段的基本技術。2．原理限制性內切酶切割后的DNA片斷經過電泳后，按分子量大小被分開，排列在瓊脂糖凝膠中，可以將特定的某條DNA帶所在的凝膠切下來，加熱或用特殊的試劑熔解凝膠，使DNA溶回到溶液中，再經過乙醇沉淀或過柱即可獲得目的 DNA酶切片段。3．器材旋渦混合器，
DNA片段的膠回收方法和注意事項
DNA片段的膠回收方法電泳洗脫法低熔點瓊脂糖凝膠電泳挖塊法凍融回收法玻璃奶回收法柱回收法膠回收注意事項將電泳槽用ddH2O反復清洗干凈，倒入新鮮配制的滅菌電泳緩沖液；根據點樣量制備合適厚度的瓊脂糖凝膠板；切膠時盡可能切掉不含DNA片段的凝膠；要盡量減少DNA在紫外下的照射時間以減少對DNA的損傷；熔
聚丙烯酰胺凝膠中DNA片段的回收（壓碎與浸泡法）
實驗方法原理 從聚丙烯酰胺凝膠中回收 DNA 的標準方法是由 Maxam 和 Gilbert (1977) 最先介紹的“壓碎與浸泡”技術。洗脫下來的 DNA 通常不含有酶抑制物及對細胞轉染或微量注射有毒害的污染物。此方法所需時間長，但是工作量小。回收率少于30%~90%，視 DNA 片段大小
聚丙烯酰胺凝膠中DNA片段的回收（壓碎與浸泡法）
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 從聚丙烯酰胺凝膠中回收 DNA 的標準方法是由 Maxam 和 Gilbert (1977) 最先介紹的“壓碎與浸泡”技術。洗脫下來的 DNA 通常不含有酶抑制物及對細胞轉染或微量注射有毒害的污染物。此方法所需時間長，但是工
聚丙烯酰胺凝膠中DNA片段的回收（壓碎與浸泡法）
從聚丙烯酰胺凝膠中回收 DNA 的標準方法是由 Maxam 和 Gilbert (1977) 最先介紹的“壓碎與浸泡”技術。洗脫下來的 DNA 通常不含有酶抑制物及對細胞轉染或微量注射有毒害的污染物。此方法所需時間長，但是工作量小。回收率少于30%~90%，視 DNA 片段大小而定。本實驗來源「分子