桿狀病毒儲液制備實驗
實驗方法原理 實驗材料 懸浮培養的 Sf 9 細胞待接種的桿狀病毒（野生型的或重組）試劑、試劑盒 含10％胎牛血清的昆蟲細胞培養液 TNM-FH儀器、耗材 150 mm 培養瓶 27℃ 培養箱 倒置顯微鏡 帶有 GH-3.7 水平轉子的4℃GPR離心機 帶螺口蓋的凍存管 液氮罐 500 ml 旋轉細胞培養瓶 多轉瓶的攬拌臺實驗步驟 1. 用 50 ml TNM-FH /10％ FBS 培養液在 500 ml 旋轉培養瓶中培養 Sf 9 細胞，直到細胞密度達到約 1 × 105 細胞/ml（見昆蟲細胞保存培養實驗）。2. 室溫下以 1000 g 離心 10 min 回收細胞，棄去上清。加入 10～20 ml 新鮮的 TNM- FH/10％ FBS 培養液重懸細胞團塊。加入感染復數（MOI）為 0.1～0.5 的病毒接種（見步驟 1.2）。MOI 以 pfu/細胞來表示。感染給定數目細胞的病毒接種物的體積=MOI （pfu/細胞）×......閱讀全文
桿狀病毒儲液制備實驗
實驗方法原理 實驗材料 懸浮培養的 Sf 9 細胞待接種的桿狀病毒（野生型的或重組）試劑、試劑盒 含10％胎牛血清的昆蟲細胞培養液 TNM-FH儀器、耗材 150 mm 培養瓶 27℃ 培養箱 倒置顯微鏡 帶有 GH-3.7 水平轉子的4℃GPR離心機 帶螺口蓋的凍存管 液氮罐 500 ml 旋轉細
桿狀病毒儲液制備實驗
基本方案 從懸浮培養中制備 基本方案 從單層培養中制備 噬斑試驗測定滴度 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料
桿狀病毒儲液制備實驗——從懸浮培養中制備
實驗材料懸浮培養的 Sf 9 細胞待接種的桿狀病毒（野生型的或重組）試劑、試劑盒含10％胎牛血清的昆蟲細胞培養液 TNM-FH儀器、耗材150 mm 培養瓶27℃ 培養箱倒置顯微鏡帶有 GH-3.7 水平轉子的4℃GPR離心機帶螺口蓋的凍存管液氮罐500 ml 旋轉細胞培養瓶多轉瓶的攬拌臺實驗步驟1
桿狀病毒儲液制備實驗——從單層培養中制備
實驗材料單層培養的 Sf 9 細胞待接種的桿狀病毒（野生型的或重組）試劑、試劑盒含10％胎牛血清的昆蟲細胞培養液 TNM-FH儀器、耗材150 mm 培養瓶27℃ 培養箱倒置顯微鏡帶有 GH-3.7 水平轉子的4℃GPR離心機帶螺口蓋的凍存管液氮罐500 ml 旋轉細胞培養瓶多轉瓶的攬拌臺實驗步驟1
桿狀病毒儲液制備實驗——噬斑試驗測定滴度
實驗材料對數生長期單層培養的 Sf 9 細胞試劑、試劑盒桿狀病毒儲液昆蟲細胞培養液儀器、耗材瓊脂糖頂層覆蓋物臺盼藍頂層覆蓋物（選用）60 mm 組織培養皿27℃ 培養箱1.5 ml 帶螺口蓋的凍存管實驗步驟1. 用含 10％ 胎牛血清的 TNM-FH 培養液稀釋處于對數生長期的 Sf 9 細胞至約
MVA－病毒儲液制備實驗
基本方案 免疫染色法滴度測定 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 成片 CEF 或 BHK-
MVA－病毒儲液制備實驗
實驗材料成片 CEF 或 BHK-21 細胞改造的痘苗病毒試劑、試劑盒MEM-10 和 MEM-2.5 完全培養基儀器、耗材150 cm2 組織培養瓶CO2培養箱Sorvall 離心機250 ml 無菌離心瓶實驗步驟1. 用 1.5 ml 胰酶/EDTA 加 8.5 ml 的維持培養基消化 7 瓶
MVA－病毒儲液制備實驗
實驗方法原理 實驗材料 成片 CEF 或 BHK-21 細胞改造的痘苗病毒試劑、試劑盒 MEM-10 和 MEM-2.5 完全培養基儀器、耗材 150 cm2 組織培養瓶CO2培養箱Sorvall 離心機250 ml 無菌離心瓶實驗步驟 1. 用 1.5 ml 胰酶/EDTA 加 8.5 ml
桿狀病毒毒種貯液的制備實驗
桿狀病毒是一類具有囊膜包裹的雙鏈環狀DNA病毒，其基因組大小為80~180 kb，在自然界中以節肢動物作為專一性宿主進行感染和傳播。實驗材料桿狀病毒試劑、試劑盒胎牛血清重組病毒儀器、耗材培養箱培養瓶轉子實驗步驟從單層培養中制備：?1a. ?以毎瓶1.8×107?Sf9細胞的密度，將細胞接種于兩個15
痘苗病毒儲液制備
基本方案 噬斑分析測定滴度 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 懸浮培養的 HeLa S3
痘苗病毒儲液制備
實驗材料懸浮培養的 HeLa S3 細胞痘苗病毒試劑、試劑盒完全 MEM-10 和 MEM-2.50.25 mg ml 胰酶儀器、耗材Sorvall H-6000A 轉子150 cm2 組織培養瓶CO2 培養箱實驗步驟1. 用血細胞計數器對懸浮培養的 HeLa S3 細胞進行細胞計數。2. 將 5×
痘苗病毒儲液制備
實驗方法原理 實驗材料 懸浮培養的 HeLa S3 細胞痘苗病毒試劑、試劑盒 完全 MEM-10 和 MEM-2.50.25 mg ml 胰酶儀器、耗材 Sorvall H-6000A 轉子150 cm2 組織培養瓶CO2 培養箱實驗步驟 1. 用血細胞計數器對懸浮培養的 HeLa S3 細胞進行細
桿狀病毒毒種貯液的制備
實驗材料?桿狀病毒試劑、試劑盒?胎牛血清重組病毒儀器、耗材?培養箱培養瓶轉子實驗步驟 從單層培養中制備：?1a.? 以毎瓶1.8×107 Sf9細胞的密度，將細胞接種于兩個150 cm2 培養瓶，在含10%胎牛血清的完全培養液中培養。于27℃讓細胞貼壁3 h，然后移去完全培養液。以感染復數為
MVA－病毒儲液制備實驗——免疫染色法滴度測定
實驗方法原理MVA 病毒滴度通常是用免疫染色法進行測定，因為 MVA 不能在 CEF 或 BHK-21 細胞中形成噬斑。實驗材料CEF 或 BHK-21 細胞MVA病毒儲液試劑、試劑盒MEM-10 和 MEM-2.5 完全培養基1:1 丙酮／甲醇PBS（含和不含3% FBS兩種）PBS／H2O2兔抗
痘苗病毒儲液制備——噬斑分析測定滴度
實驗方法原理經胰酶作用的系列稀釋病毒儲液常被用于感染適當的細胞系。經過幾天的培養后，吸出培養基，將細胞用結晶紫染色。由于感染細胞變縮、變圓和脫落，形成直徑 1～2 mm 顏色較淡的噬斑。實驗材料生長良好的貼壁培養的單層 BSC-1 細胞病毒儲液試劑、試劑盒0.1% 結晶紫（溶于 20% 乙醇）儀器、
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗——小規模表達
實驗方法原理分析方案依賴于表達蛋白的天然特性。實驗材料草地夜蛾（Sf9）細胞高滴度的重組桿狀病毒儲液試劑、試劑盒PBS1×SDS樣品緩沖液儀器、耗材含 10% 胎牛血清（FBS）的TNM-FH昆蟲培養基60 mm 組織培養皿27℃ 培養箱（濕度可選）15 ml 聚丙烯離心管帶有 GH-3.7 水平轉
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗
基本方案 小規模表達 輔助方案1 蛋白質生產高峰期的確定 輔助方案2重組蛋白的代謝標記 基本方案2 重組蛋白大規模生產 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗
實驗方法原理 分析方案依賴于表達蛋白的天然特性。實驗材料 草地夜蛾（Sf9）細胞高滴度的重組桿狀病毒儲液試劑、試劑盒 PBS1×SDS樣品緩沖液儀器、耗材 含 10% 胎牛血清（FBS）的TNM-FH昆蟲培養基60 mm 組織培養皿27℃ 培養箱（濕度可選）15 ml 聚丙烯離心管帶有 GH-3.7
重組桿狀病毒的純化實驗
實驗材料?桿狀病毒試劑、試劑盒?瓊脂牛血清儀器、耗材?培養瓶凍存管實驗步驟 1.? 制備病毒上清的系列稀釋液，該病毒上清獲得自在無血清完全培養液中轉染 pAC360β-gal DNA的細胞。在含150 μg/ml X-gal 的瓊脂糖頂層覆蓋物下病毒形成蝕斑。?2.? 當蝕斑形成后，用滅菌巴斯德吸管
裸眼篩選重組桿狀病毒實驗
實驗材料 桿狀病毒試劑、試劑盒 瓊脂糖儀器、耗材 解剖顯微鏡倒置顯微鏡實驗步驟 解剖顯微鏡下篩選?1. ?倒轉蝕斑平皿，使其處于顯微鏡的黑色背景下，以銳角向平皿照射一束亮光。2. ?檢查野生型病毒感染的細胞中含有包涵體的蝕斑，這種蝕斑看上去折光性強，帶有輕微的黃色。3. ?檢查β-gal 重組病毒感
裸眼篩選重組桿狀病毒實驗
桿狀病毒是一類在自然界中專一性感染節肢動物的DNA病毒，病毒粒子呈桿狀，基因組為雙鏈環狀DNA分子，DNA以超螺旋形式壓縮包裝在桿狀衣殼內，大小在90~180 Kb 之間。目前桿狀病毒作為高效、安全的無公害生物蟲劑廣泛應用于害蟲防治。實驗材料桿狀病毒試劑、試劑盒瓊脂糖儀器、耗材解剖顯微鏡倒置顯微鏡實
昆蟲細胞共轉染實驗
基本方案 用線性化桿狀病毒DNA ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 草地夜蛾（Sf 9）細胞
轉運反應成分的制備實驗——胞質液的制備
實驗材料血試劑、試劑盒酸-檸檬酸鹽-葡萄糖溶液裂解緩沖液儀器、耗材離心機實驗步驟一、網狀細胞和紅細胞胞質液的制備1. 自動物身上采血，每 7 ml 血加 1 ml 酸-檸檬酸鹽-葡萄糖溶液（ACD；75 mmol/L 檸檬酸三鈉，38 mmol/L 檸檬酸，136 mmol/L 葡萄糖，pH 5.0
怎么固定儲液器？
儲液器各部件間一般采用釬焊的連接方式固定。因為釬焊是采用液相溫度（熔點）比母材固相溫度低的金屬材料作為釬料，將零件和釬料加熱到釬料熔化，利用液態釬料潤濕母材，填充接頭間隙并與母材相互溶解和擴散而實現連接零件的方法。 釬焊的優點 a)、釬焊接頭平整光滑，外形美觀。 b)、釬焊加熱溫度較低，對
野生型桿狀病毒的純化實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 桿狀病毒 試劑、試劑盒
野生型桿狀病毒的純化實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 桿狀病毒 試劑、試劑盒
野生型桿狀病毒的純化實驗
實驗材料桿狀病毒試劑、試劑盒TE蛋白酶KN-十二烷基肌氨酸苯酚氯仿異戊醇乙醇乙酸鈉儀器、耗材培養瓶錐形瓶轉子離心機聚苯乙烯管實驗步驟1. ?以每1.8x107細胞的密度接種Sf9細胞于至少10個150 cm2?培養瓶中。27℃溫育約2 h，讓細胞牢固貼壁，以0.1的感染復數用野生型AcMNPV感染。
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗——重組蛋白的代謝標記
實驗方法原理由于重組蛋白表達的時候，宿主蛋白質的合成基本終止，因此體內代謝標記是檢測重組蛋白的敏感方法。所有的標記氨基酸都摻入到晚期病毒特異的蛋白質（包括目的蛋白）的合成。35S 標記的甲硫氨酸和半胱氨酸是常用的放射標記的氨基酸。為了獲得更好的結果，在標記之前細胞內的這兩種氨基酸應當被清除：將細胞在
昆蟲細胞共轉染實驗
實驗方法原理 實驗材料 草地夜蛾（Sf 9）細胞含目的基因的重組桿狀病毒轉移質粒陽性對照載體：pVL 1392 - XylE試劑、試劑盒 ORF 1629 缺失的線性 AcMNPV DNA轉染緩沖液 B轉染緩沖液A500 mmol／L 兒茶酚／50 mmol／L 硫酸氫鈉儀器、耗材 含 10％ 胎牛
昆蟲細胞共轉染實驗
實驗材料草地夜蛾（Sf 9）細胞含目的基因的重組桿狀病毒轉移質粒陽性對照載體：pVL 1392 - XylE試劑、試劑盒ORF 1629 缺失的線性 AcMNPV DNA轉染緩沖液 B轉染緩沖液A500 mmol／L 兒茶酚／50 mmol／L 硫酸氫鈉儀器、耗材含 10％ 胎牛血清（FBS）的 T