模板DNA的準備、實驗的組織和PCR擴增實驗
試劑、試劑盒 PCR 緩沖液ddH20基因組 DNAdNTP寡核苷酸引物儀器、耗材 離心機和轉子丙烯酸防護板過濾阻擋吸頭多道移液器PCR 儀托盤 固定器裝置底座管蓋小管實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑含 15 mmol/LMgCl2 的 10XPCR 緩沖液 (GeneAmpPCR 緩沖液 I，AppliedBiosystems)滅過菌的 ddH202. 酶和酶緩沖液TaqDNA 聚合酶，(AppliedBiosystems 或 Invitrogen)3. 核酸和寡核苷酸基因組 DNA10 mmol/L dNTP(GeneAmpPCRdNTP 混合物，AppliedBiosystems)寡核苷酸引物（Invitrogen 公司合成，稀釋成 lOumol/L)4. 離心機和轉子用翻轉吊桶式轉子和微板適配器離心5. 專用設備丙烯酸防護板（acrylicshield)過濾阻擋吸頭（filterbarriertips)多道移液......閱讀全文
模板－DNA－的準備、實驗的組織和－PCR－擴增實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 PCR 緩沖液 ddH20 基因組 DNA dNTP 寡核苷酸引物 儀器、耗材
模板－DNA－的準備、實驗的組織和－PCR－擴增實驗
可以用各種方法分離基因組 DNA, 主要決定于初始材料的種類（血液還是組織）和數量。所有制備的 DNA 都應該儲存于 pH8.0 的 TE 緩沖液中并裝在滅菌的 Eppendorf 管內。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒PCR 緩沖液ddH20基因組 DNA
模板－DNA－的準備、實驗的組織和－PCR－擴增實驗
試劑、試劑盒 PCR 緩沖液ddH20基因組 DNAdNTP寡核苷酸引物儀器、耗材 離心機和轉子丙烯酸防護板過濾阻擋吸頭多道移液器PCR 儀托盤 固定器裝置底座管蓋小管實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑含 15 mmol/LMgCl2 的 10XPCR 緩沖液 (GeneAmpPCR 緩沖液
用于－PCR－的模板－DNA－制備實驗
酚-氯仿法提取石蠟組織中 DNA 改進的石蠟切片 DNA 提取方法 直接法（DNA 免提法） 冰凍片 含血標本 胸腹水或尿液 ? ? ? ? ? ?
用于－PCR－的模板－DNA－制備實驗
實驗方法原理 實驗步驟 1. 10 mm 厚石蠟切片 10～15 張，置入消毒后的 1.5 ml Eppendorf 管中。2. 脫蠟 二甲苯 1200 μl，9000 r/min，8 min×3。3. 脫水無水乙醇 1200 μl，9000 r/min，5 min×3。4. 打開 Eppendor
差異－DNA－的－PCR－擴增實驗
在本方案所描述的反應中，差異 DNA 被選擇性地擴增。每個實驗至少應該有 4 個反應：①已消減的檢測 DNA;②未消減的檢測者對照（1-c);③反向消減的檢測 DNA;④反向未消減的對照（2-c)。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑
差異－DNA－的－PCR－擴增實驗
實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑dNTP 溶液（包含所有 4 種 dNTP，各 10 mmol/L)2. 酶和酶緩沖液PCR 反應緩沖液，10X聚合酶混合液，50X(Advantage2，Clontech，或相當產品）3. 核酸和寡核苷
差異－DNA－的－PCR－擴增實驗
實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑dNTP 溶液（包含所有 4 種 dNTP，各 10 mmol/L)2. 酶和酶緩沖液PCR 反應緩沖液，10X聚合酶混合液，50X(Advantage2，Clontech，或相當產品）3. 核酸和寡核苷酸DNA 樣品（即方案 2 第 16 步中的各消減樣品
用于PCR的模板DNA制備實驗——酚氯仿法提取石蠟組織中DNA
模板 DNA 質量直接影響 PCR 結果，是 PCR 成功的關鍵之一。根據其檢測對象（組織細胞材料）的不同，有不同的制備方法，常用的材料有石蠟切片、冰凍切片、血細胞、胸腹水等。實驗步驟1. 10 mm 厚石蠟切片 10～15 張，置入消毒后的 1.5 ml Eppendorf 管中。2. 脫蠟 二甲
用于－PCR－的模板－DNA－制備實驗——含血標本
實驗步驟1. 3 ml 外周血或 1 ml 骨髓液放入含 50 μl 0.5mol/L EDTA 的無菌離心管（15 ml 管）中。2. 2000 r/min 離心 10 min。吸去血漿，用指彈勻剩余的有核細胞和紅細胞，加入紅細胞溶解液 10 ml 并混勻，常溫下放置 30 min。紅細胞溶解液配
用于－PCR－的模板－DNA－制備實驗——冰凍片
實驗步驟1. 將 10 μl 冰凍切片直接放入含組織裂解液的離心管中。2. 無菌尖頭刀片刮下，放入 300～900 μl 組織裂解液中，并加入 20 mg/ml 蛋白酶 K（PK）10～15 μl，封口膜封口，置 55℃ 3 h 以上。3. 其間用指輕彈離心管以利裂解。若有沉淀，再加入 5～10 μ
PCR擴增DNA（PCR－Amplify－DNA）實驗原理、材料和操作步驟
【實驗原理】聚合酶鏈反應（polymerasechainreaction，PCR）是一種體外 DNA擴增技術，1985年由Mullis等人創立。該技術能在幾小時的實驗操作中，將人為選定的一段DNA擴增幾百萬倍，具有靈敏度高、特異性強、操作簡便和應用廣泛等優點，目前已成為分子生物學及基因工程中極為
DNA和RNA靶序列的原位PCR擴增實驗
實驗材料 樣品試劑、試劑盒 雙氧水PBS蛋白酶KRNA酶DTTdNTPKClMgCl2Tris·Cl儀器、耗材 加濕盒熱循環儀實驗步驟 1. ?將載有固定樣品的載玻片置105℃加熱塊上5~120 s。?2. ?載玻片放入含0.3%H2O2中，于37℃或室溫溫育過夜，以滅活內源性過氧化物酶活性，然后以
DNA和RNA靶序列的原位PCR擴增實驗
原位PCR是Hasse等于1990年建立的技術，就是在組織細胞里進行PCR反應，它結合了具有細胞定位能力的原位雜交和高度特異敏感的PCR技術的優點，是細胞學科研與臨床診斷領域里的一項有較大潛力的新技術。實驗材料樣品試劑、試劑盒雙氧水PBS蛋白酶KRNA酶DTTdNTPKClMgCl2Tris·Cl儀
PCR擴增模板和抗體可變區基因的擴增
PCR?擴增模板和抗體可變區基因的擴增???? 如果構建Fab抗體庫,必需利用RT-PCR獲取抗體基因;構建ScFv抗體庫,既可以DNA作模板,也可以cDNA作模板。本室在構建小鼠ScFv抗體庫過程中,主要采用DNA作為擴增模板。?【材料和試劑】（1）PCR儀（2）Taq酶（3）氯仿（4）瓊脂糖?【
用于PCR的模板DNA制備實驗——直接法（DNA－免提法）
實驗步驟1. 標本太少時，可將一張石蠟切片經脫蠟，水化，蒸餾水清洗，無菌蒸餾水浸泡，取出晾至半干。2. 加入 20～80 μl 直接裂解液中，加 20 mg/ml 蛋白酶 K 0.2～1 μl，放置 55℃ 裂解 3 h 以上；100℃10 min 滅活蛋白酶 K；10000 r/min 離心 10
用于－PCR－的模板－DNA－制備實驗——胸腹水或尿液
實驗步驟1. 標本 10 ml 以上，2000 r/min 離心 10 分鐘，倒去上清液。用指彈勻沉淀物，加入適量組織裂解液，37℃ 下放置半小時以上。2. 無菌尖頭刀片刮下，放入 300～900 μl 組織裂解液中，并加入 20 mg/ml 蛋白酶 K（PK）10～15 μl，封口膜封口，置 55
用于PCR的模板DNA制備實驗——改進的石蠟切片－DNA－提取方法
實驗步驟1. 5 μm 厚的石蠟切片 5 至 10 張貼在干凈的載玻片上，常規烘片，脫蠟，水化，蒸餾水清洗，無菌蒸餾水浸泡，取出晾至半干。2. 無菌尖頭刀片刮下，放入 300～900 μl 組織裂解液中，并加入 20 mg/ml 蛋白酶 K（PK）10～15 μl，封口膜封口，置 55℃ 3 h 以
高GC比模板的PCR擴增
PCR條件的優化是一個麻煩耗時的過程，涉及到溫度、時間、鎂離子、引物、dNTP、Taq酶、模板等多個因素的調整。一般來說利用熱啟動，比如Platinum Taq DNA聚合酶（Invitrogen）可以達到更高的特異性，降低對鎂離子濃度的依賴，并且有利于提高“問題模板”的產量。然而，傳統的PCR條件
高GC比模板的PCR擴增
PCR條件的優化是一個麻煩耗時的過程，涉及到溫度、時間、鎂離子、引物、dNTP、Taq酶、模板等多個因素的調整。一般來說利用熱啟動，比如Platinum Taq?DNA聚合酶（Invitrogen）可以達到更高的特異性，降低對鎂離子濃度的依賴，并且有利于提高“問題模板”的產量。然而，傳統的PCR條件
高GC比模板的PCR擴增
PCR條件的優化是一個麻煩耗時的過程，涉及到溫度、時間、鎂離子、引物、dNTP、Taq酶、模板等多個因素的調整。一般來說利用熱啟動，比如Platinum Taq DNA聚合酶（Invitrogen）可以達到更高的特異性，降低對鎂離子濃度的依賴，并且有利于提高“問題模板”的產量。然而，傳統的PCR條件
PCR擴增分離目的DNA片段實驗原理、材料和步驟
一、目的了解多聚合酶鏈反應DNA 擴增技術的基本原理和實驗應用，掌握PCR反應基本技術。二、原理PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶鏈式反應是1986 年由Kallis Mullis 發現。這項技術已廣泛地應用于分子生物學各個領域，它不僅可用于基因分離克隆和核
PCR擴增分離目的DNA片段實驗原理、材料和步驟
PCR擴增法實驗材料 DNA 模板 試劑、試劑盒 電泳緩沖液 加樣緩沖液 溴化乙錠溶液 瓊脂糖 TaqDNA 多聚酶 5′反應緩沖液
PCR擴增分離目的DNA片段實驗原理、材料和步驟
PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶鏈式反應是1986 年由Kallis Mullis 發現。這項技術已廣泛地應用于分子生物學各個領域，它不僅可用于基因分離克隆和核酸序列分析，還可用于突變體和重組體的構建，基因表達調控的研究，基因多態性的分析，遺傳病和傳染病診斷，腫瘤
基因的PCR擴增實驗擴增不出DNA條帶是什么原因
可能有很多原因，最常見的原因是1.模板不干凈，2.引物設計不當，3.退火溫度過高，等等
制備DNA測序模板實驗
制備單鏈M13噬菌體DNA 小量裂解物中制備λ噬菌體DNA 雙脫氧測序的雙鏈質粒DNA的堿變性 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 大腸桿菌
制備DNA測序模板實驗
實驗材料 大腸桿菌試劑、試劑盒 LBTEM13聚乙二醇容易讓頂層瓊脂乙酸鈉乙醇儀器、耗材 巴斯德吸管試管離心機實驗步驟 1. ?如果起始用M13復制型DNA或M13單鏈DNA，以0.5 ng 重組M13mp復制型DNA或5~10 ng 單鏈DNA轉化40 μl ?感受態大腸桿菌DH5αF'株
PCR擴增分離目的DNA片段實驗原理、材料和步驟（一）
一、目的了解多聚合酶鏈反應DNA 擴增技術的基本原理和實驗應用，掌握PCR反應基本技術。二、原理PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶鏈式反應是1986 年由Kallis Mullis發現。這項技術已廣泛地應用于分子生物學各個領域，它不僅可用于基因分離克隆和核酸
PCR擴增分離目的DNA片段實驗原理、材料和步驟（二）
三、材料（一）儀器與器皿PRC 擴增儀（PE2400），瓊脂糖凝膠電泳設備，微量取樣器，一次性指形管，凝膠成像儀,玻片（二）試劑與材料1．瓊脂糖凝膠電泳試劑1）電泳緩沖液：Tris—乙酸0.04mol/L PH8.0? 0.002mol/L EDTA2）加樣緩沖液：0.25%溴酚蘭40% w/v蔗糖
基因的PCR擴增實驗原理、實驗材料和操作步驟
實驗原理單鏈DNA在互補寡聚核苷酸片段的引導下，可以利用DNA聚合酶按5’→3’方向復制出互補DNA。這時單鏈DNA稱為模板DNA，寡聚核苷酸片段稱為引物（Primer），合成的互補DNA稱為產物DNA。雙鏈DNA分子經高溫變性后成為兩條單鏈DNA，它們都可作為單鏈模板DNA，在相應的引物引導下，用