關于組織塊培養法的概述
一、翻轉干涸 1、將組織剪成1mm3左右的組織塊 2、用PBS緩沖液清洗組織塊3次 3、將組織塊按照一定間距轉入培養瓶內 4、輕輕將培養瓶翻轉過來,將適量培養液加到非細胞生長面上,注意翻瓶時勿令組織小塊流動,塞好瓶塞置36.5℃溫箱培養2小時左右(勿超過4小時),使小塊微干涸 5、從微箱中取出培養瓶,開塞,46度斜持培養瓶,箱瓶底腳部輕輕注入培養液少許,然后緩緩再把培養瓶翻轉過來,讓培養液慢慢覆蓋附于瓶底上的組織小塊置溫箱中靜止培養 6、待細胞從組織塊游出量增后,再補加培養液 二、薄層培養 1、將組織剪成1mm3左右的組織塊 2、用PBS緩沖液清洗組織塊3次 3、將組織塊按照一定間距轉入培養瓶內4、靜置30分鐘(使組織塊更好的貼壁) 5、每瓶加入2.0mL新鮮培養液(緩慢,防止組織塊浮起),塞好瓶塞置37oC恒溫培養箱內培養 6、根據培養液的顏色變化,更換培養液(每天進行細胞形態觀測,細胞計數,測上清......閱讀全文
關于組織塊培養法的概述
一、翻轉干涸 1、將組織剪成1mm3左右的組織塊 2、用PBS緩沖液清洗組織塊3次 3、將組織塊按照一定間距轉入培養瓶內 4、輕輕將培養瓶翻轉過來,將適量培養液加到非細胞生長面上,注意翻瓶時勿令組織小塊流動,塞好瓶塞置36.5℃溫箱培養2小時左右(勿超過4小時),使小塊微干涸 5、從微
傳代培養法/組織塊培養法/初代消化培養常規組織培養法
一、初代消化培養法 1、 準備:取各種已消毒的培養用品置于凈化臺面,紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。 2、 布局:點燃酒精燈,安裝吸管帽。 3、處理組織:把組織塊置于燒杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如懷疑組織可能污染,可先置于含有青鏈霉素的
常規組織培養法:初代消化培養法、初代組織塊培養法與...
常規組織培養法:初代消化培養法、初代組織塊培養法與傳代培養法 1)初代消化培養法: 1、準備:取各種已消毒的培養用品置于凈化臺面,紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。 2、布局:點燃酒精燈,安裝吸管帽。 3、處理組織:把組織塊置于燒杯中,用Hanks液
細胞原代培養實驗——組織塊直接培養法
實驗材料孕鼠新生小鼠試劑、試劑盒RPMI1640培養基牛血清胰蛋白酶Hanks液酒精青霉素鏈霉素儀器、耗材培養瓶青霉素瓶廢液缸血球計數板蠟盤手術器械大頭針離心管小玻璃漏斗三角燒瓶平皿吸管試管移液管無菌紗布無菌眼科剪實驗步驟?一、將孕鼠或新生小鼠拉頸椎致死,置75%酒精泡2-3秒鐘(時間不能過長、以免
初代細胞培養實驗——組織塊培養法
實驗材料組織試劑、試劑盒Hanks培養液胰蛋白酶NaHCO3儀器、耗材吸管培養瓶燒杯眼科剪眼科鑷實驗步驟1. ?剪切把組織小塊(1cm3)置入小燒杯或青霉素小瓶中,用Hanks液漂液二三次以去掉表面血污,吸凈Hanks液,用眼科剪反復剪切成1mm3塊為止;2. ?擺布用彎頭吸管吸取若干小塊,置入培養
腫瘤細胞原代培養實驗——組織塊法
腫瘤細胞原代培養可以:(1)研究癌變機理;(2)研究抗癌藥檢測;(3)研究癌分子生物學;(4)用于闡明和解決癌癥。實驗方法原理腫瘤細胞的原代培養與正常細胞的原代培養的條件基本相似。一般常用原代細胞的基礎培養基,10%血清濃度即可,在原代培養時需加入原代細胞培養的特制添加物,或原患者血清(1%-2%)
原代細胞組織塊培養法,細胞一直未爬出
這個可能和你用的酶液濃度、消化時間有關,消化不足或消化過頭,都會導致細胞出不了,齊氏生物建議您從酶液濃度、消化時間上重新摸索一下。
徠卡顯微鏡關于組織塊的體積
徠卡生物顯微鏡到目前為止,冰涼固定,冰凍超薄切片及冰凍干操是組織及細胞x線微區的常規方法。對該方法的細節做以下幾點說明:?徠卡生物顯微鏡有聚光鏡的顯微鏡則可將聚光鏡作上下移動使其亮度適中,另外也可以改變可變光闡的孔徑以達到適中9b亮度。如果光線太陽時,則可將聚光鏡作適當的向上升,可變光鬧的孔徑作適當
家兔椎間盤細胞培養實驗——貼塊法
家兔椎間盤細胞培養可以:(1)獲得家兔椎間盤細胞;(2)用于椎間盤相關課題研究;(3)用于家兔模型研究。實驗方法原理首先建立家兔椎間盤細胞的體外培養系統,其中,第一組給予純氧,另外3組給予不同濃度的臭氧:30 ug/ml,60 ug/ml和80 ug/ml,然后于15 min及30 min后,采用臺
常規組織培養法
一、初代消化培養法1、 準備:取各種已消毒的培養用品置于凈化臺面,紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。2、 布局:點燃酒精燈,安裝吸管帽。3、?處理組織:把組織塊置于燒杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如懷疑組織可能污染,可先置于含有青鏈霉素的混合液中30~60分
組織芯片的制備——石蠟塊組織芯片
實驗方法原理首先制作模具蠟塊(受體,recipient)。從供體蠟塊(donor)上取樣,取樣針分別有 0.6 mm、1.0 mm、1.5 mm 和 2.0 mm 幾種,在 1 個大小 45 mm×20 mm 的模具蠟塊上,以 0.6 mm 取樣針間隔 0.1 mm,可排列 1000 余個位點,如取
徠卡生物顯微鏡關于組織塊的體積
徠卡生物顯微鏡到目前為止,冰涼固定,冰凍超薄切片及冰凍干操是組織及細胞x線微區的常規方法。對該方法的細節做以下幾點說明:?徠卡生物顯微鏡有聚光鏡的顯微鏡則可將聚光鏡作上下移動使其亮度適中,另外也可以改變可變光闡的孔徑以達到適中9b亮度。如果光線太陽時,則可將聚光鏡作適當的向上升,可變光鬧的孔徑作適當
生化培養箱對雞胚背根神經節組織塊的培養
?主要用于神經生長因子(NGF)等神經營養因子的生物活性測定。在差倒置顯微鏡下觀察以神經突起的生長長度和密度為指標半定量評估NGF的活性。1、材料和方法(1)選正常受精的雞蛋,置于37℃生化培養箱內孵化,每日翻動雞蛋一次。(2)取孵化8-12 d 的雞蛋, 用70% 酒精消毒蛋殼,從氣室端敲開蛋殼,
動物組織塊DNA的提取
實驗目的 1. 學習并掌握動物組織總DNA的提取方法及其原理。 2. 從肝臟組織中提取到一定量的純凈的DNA樣品。 實驗原理 DNA是一切生物細胞的重要組成成分,主要存在于細胞核中。通過研磨和SDS作用破碎細胞;苯酚和氯仿可使蛋白質變性,用其混合液(酚:氯仿:異戊醇)重復抽提,使蛋白質變性,然后離
組織蠟塊切片的保存
許多實驗室研究人員習慣將組織蠟塊切片后長期保存在室溫條件下,而切片后的組織在室溫下長期保存抗原易損失。研究發現,切片在室溫下保存3個月以上,免疫組化染色結果會出現減弱或陰性,故進行了新、舊切片保存時間對照實驗。選擇11種不同組織蠟塊每例連續切10片,共110片,常溫空氣中放置1個月、3個月、6個月、
動物組織塊DNA的提取
實驗原理DNA是一切生物細胞的重要組成成分,主要存在于細胞核中。通過研磨和SDS作用破碎細胞;苯酚和氯仿可使蛋白質變性,用其混合液(酚:氯仿:異戊醇)重復抽提,使蛋白質變性,然后離心除去變性蛋白質;RNase降解RNA,從而得到純凈的DNA分子。實驗試劑1.生理鹽水2.十二烷基硫酸鈉(SDS)3.三
動物組織塊DNA的提取
實驗概要學習并掌握動物組織總DNA的提取方法及其原理。從肝臟組織中提取到一定量的純凈的DNA樣品。實驗原理DNA是一切生物細胞的重要組成成分,主要存在于細胞核中。通過研磨和SDS作用破碎細胞;苯酚和氯仿可使蛋白質變性,用其混合液(酚:氯仿:異戊醇)重復抽提,使蛋白質變性,然后離心除去變性蛋白質;RN
動物組織塊DNA的提取
【實驗目的】(1)學習并掌握動物組織總DNA的提取方法及其原理。(2)從肝臟組織中提取到一定量的純凈的DNA樣品。【實驗原理】DNA是一切生物細胞的重要組成成分,主要存在于細胞核中。通過研磨和SDS作用破碎細胞;苯酚和氯仿可使蛋白質變性,用其混合液(酚:氯仿:異戊醇)重復抽提,使蛋白質變性,然后離心
鉤蚴培養法的概述
鉤蚴培養法是一項用于檢查寄生蟲的輔助檢查方法。亦稱試管濾紙培養法。在適宜的溫度和濕度的條件下,鉤蟲卵在數日內發育并孵出幼蟲,一般在3~5天后,可用肉眼或放大鏡觀察,檢出率為直接涂片法的7倍,也優于飽和鹽水浮聚法,孵出的絲狀蚴可作蟲種鑒定。此相檢查可以用于判斷相應的病征。
病毒的培養方法實驗—組織培養法原代細胞單層培養
實驗方法原理組織培養是目前培養病毒應用最廣的一種培養方法,其優點是①經濟適用,結果正確且敏感;②較實驗動物易于控制。原代細胞單層培養法,是指動物(包括脊椎動物和無脊椎動物)的組織自機體取出后,經胰酶或其他細胞分散劑消化處理,得到單個細胞懸液。以一定量接種到特定容器中,加入細胞生長所必需的營養液,置合
關于組織培養技術的培養方法介紹
1、非試管微組織快繁 非試管微組織快繁技術是將外植體(一般要求帶一葉一芽)放置在室內外普通沙子培養基上進行培養,利用植物腋芽自然倍增達到快速繁殖的目的。一般植物7~15天可以生長出根系。此技術投資低,操作環節少。 2、試管組織培養 試管組織培養是將外植體(即離體組織、器官或細胞)放置在組培
關于內標法的概述
內標法(Internal Standard Method)是將一定重量的純物質作為內標物(參見內標物條)加到一定量的被分析樣品混合物中,然后對含有內標物的樣品進行色譜分析,分別測定內標物和待測組分的峰面積(或峰高)及相對校正因子,按公式即可求出被測組分在樣品中的百分含量。內標法是色譜分析中一種比
大鼠主動脈內皮細胞培養實驗——貼塊法
大鼠血管內皮細胞培養可用于:(1)血液流動性、防止血栓形成、調節血管張力等研究;(2)選擇性通透性以及免疫調節等方面研究。實驗方法原理貼塊法適用于內皮細胞產量低的、管徑較小血管的內皮細胞培養,其方法較酶消化法簡便、經濟。實驗材料雄性Wistar大鼠試劑、試劑盒DMEM胎牛血清內皮細胞生長因子肝素鈉青
人臍動脈平滑肌細胞培養實驗——貼塊法
實驗方法原理運用貼塊法進行人臍動脈血管平滑肌細胞的培養,并用倒置顯微鏡進行形態學觀察和用免疫組化對培養細胞進行鑒定。實驗材料臍帶試劑、試劑盒膠原酶消化液胰蛋白酶膠原酶彈性蛋白酶DMEM儀器、耗材眼科剪滴管離心機培養皿CO2培養箱實驗步驟一、實驗步驟1. ?要用胎牛血清。開始用的是小牛血清,所以總是不
細胞生物基本方法:常規組織培養法
常規組織培養法1)初代消化培養法1.??????準備:取各種已消毒的培養用品置于凈化臺面,紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。2.??????布局:點燃酒精燈,安裝吸管帽。3.??????處理組織:把組織塊置于燒杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如懷疑組織可能污染
關于組織蛋白酶的概述
組織蛋白酶cathepsin 在各種動物組織的細胞內(特別是 溶酶體部分)發現的一類蛋白酶。此名源自希臘語的“消化”,為威爾斯達特(R.Willstāatter,1929)命名的。來源于同一種類組織細胞的也是由組織蛋白酶A.B.C.D.E等多種酶組成。可以根據所作用的代表性 底物的種類進行分類,
大鼠主動脈平滑肌細胞培養實驗_貼塊法
大鼠主動脈平滑肌細胞培養可用于:(1)獲得大鼠主動脈平滑肌細胞;(2)用于血管疾病研究;(3)用于動脈疾病研究。實驗方法原理運用組織塊貼壁法進行SD大鼠胸主動脈平滑肌細胞培養,并用倒置相差顯微鏡觀察、HE染色后形態學觀察以及用免疫組化對培養細胞進行鑒定。實驗材料SD大鼠試劑、試劑盒PBSFBSDME
人胃癌組織塊裸鼠胃癌原位移植模型的建立凝血酶法
人胃癌組織塊裸鼠胃癌原位移植模型的建立可以:(1)為研究胃癌的發病機制提供理想的動物模型;(2)研究胃癌實驗治療提供理想的動物模型;(3)建立一種最能體現人體胃癌侵襲和轉移的理想的動物模型。實驗材料BALB C nu nu裸鼠人胃癌細胞株SGC-7901試劑、試劑盒人纖維蛋白原凍干粉人凝血酶凍干粉凝
關于碘量法的概述
1、定義 碘量法是 氧化還原滴定法中,應用比較廣泛的一種方法。這是因為電對I2-I-的標準 電位既不高,也不低,碘可做為氧化劑而被中強的還原劑(如Sn2+,H2S)等所還原;碘離子也可做為還原劑而被中強的或強的氧化劑(如H2SO4,IO3-,Cr2O72-,MnO4-等)所氧化。 2、方法概
關于高層培養基的概述
固體培養基solid culture medium 的一種形式;制作時應趁熱定量分裝在試管內,直立凝固而制成的稱為高層培養基, 高層培養基:這樣接入菌種后雖然發育的面小了一點,但培養基的厚度增大,營養豐富,時間長些也不容易干燥、開裂。常用于保存菌種。 與高層培養基相對和并列的概念是:斜面培養