蛋白質氨基端及羧基端序列分析實驗5
方案5 磷酸化多肽的固相微量測序實驗實驗材料放射性標記的多肽試劑、試劑盒碳二亞胺試劑偶聯緩沖液甲醇-水多肽溶劑S3 (氯丁烷 正丁醇）閃爍液儀器、耗材ATZ-收集器加熱塊小滴管Mylar 聚酯薄膜蛋白質測序儀閃爍計數器Sequelon-AA 試劑盒測試管實驗步驟1.將放射性標記的肽段在小試管中溶解于 20ul 適當的溶劑中（如含或不含 0.1%TFA 的 30% 乙腈水溶液，可能會將多肽從 RP-HPLC 柱上洗脫下來）。加熱混合物至 55°C，直至溶解。2.用契侖科夫法在閃爍計數器中計數（注音：契侖科夫計數時不加閃爍液）。3.將 Sequelon-AA 盤從試劑盒中取出，放置于 55°C 的聚醋薄膜上。4.滴加放射性標記的多肽到 Sequelon-AA 盤上，將盤完全干透。在閃爍計數器中對盤和樣品管進行計數。注意：仍然不加任何閃爍液。5.清洗管 3 次，每次用 10~20ul 多肽溶劑（與溶解多肽的溶液相同）。將清洗液滴加到 ......閱讀全文
蛋白質氨基端及羧基端序列分析實驗5
方案5 磷酸化多肽的固相微量測序實驗實驗材料放射性標記的多肽試劑、試劑盒碳二亞胺試劑偶聯緩沖液甲醇-水多肽溶劑S3 (氯丁烷 正丁醇）閃爍液儀器、耗材ATZ-收集器加熱塊小滴管Mylar 聚酯薄膜蛋白質測序儀閃爍計數器Sequelon-AA 試劑盒測試管實驗步驟1.將放射性標記的肽段在小試管中溶解于
蛋白質氨基端及羧基端序列分析實驗
方案1 兩相柱測序儀的樣品上樣實驗 方案2 將蛋白質從凝膠電轉移至 PVDF 膜實驗 方案3 檢測 PVDF 膜上的蛋白質實驗 方案4 濃縮聚丙烯酰胺凝膠上的蛋白質點實驗 方案5 磷酸化多肽的固相微量測序實驗 方案6 羧基端序列分
蛋白質氨基端及羧基端序列分析實驗
方案1 兩相柱測序儀的樣品上樣實驗實驗材料樣品溶液試劑、試劑盒甲醇（HPLC級）三氟乙酸（TFA）儀器、耗材雙向測序柱（Agilent）氮氣供應設備聚丙烯試管樣品加樣器上樣漏斗實驗步驟一、浸潤層析柱1.將準備好的兩相柱的親水段（凸向接頭）移開，放在一邊。2.將柱的疏水段（凹向接頭）和上樣漏斗裝配在一
蛋白質氨基端及羧基端序列分析實驗4
方案4 濃縮聚丙烯酰胺凝膠上的蛋白質點實驗實驗材料包含目的蛋白的二維電泳凝膠點試劑、試劑盒丙烯酰胺混合物（30%）瓊脂糖 50g L考馬斯亮藍染色液脫色液平衡緩沖液10 X 聚丙烯酰胺電泳緩沖液濃縮膠儀器、耗材巴氏滴管聚丙烯管Protean II xi 2-D 電泳槽（Bio-Rad)注射器試管管式
蛋白質氨基端及羧基端序列分析實驗6
方案6 羧基端序列分析實驗實驗材料利用一維或二維聚丙烯酰胺凝膠分離的蛋白質或溶液中的蛋白質試劑、試劑盒乙酸酐 二甲基吡啶烷基化乙內硫酰脲 (ATH) 氨基酸標準品溴甲基萘的乙腈溶液考馬斯亮藍（R250）二異丙基乙胺（DIEA)的庚烷溶液乙酸乙酯甲醇N-甲基咪唑的乙腈溶液異氰酸苯酯的乙腈溶液哌嗪硫氰酸
蛋白質氨基端及羧基端序列分析實驗3
方案3 檢測 PVDF 膜上的蛋白質實驗實驗材料含目的蛋白的 PVDF 膜試劑、試劑盒考馬斯亮藍染色液脫色液儀器、耗材塑料容器實驗步驟1.依方案2 電轉移后，將 PVDF膜迅速放于塑料容器中，并加人考馬斯亮藍染色液浸沒膜。室溫下染 5?10 min 。2.棄去染色液，加人脫色液浸沒膜，在 PVDF
蛋白質氨基端及羧基端序列分析實驗2
方案2 將蛋白質從凝膠電轉移至 PVDF 膜實驗實驗材料含目的蛋白樣品的聚丙烯酰胺凝膠（ 未染色）試劑、試劑盒CAPS甲醇轉移緩沖液儀器、耗材電印跡設備塑料容器聚偏二氟乙烯（PVDF)膜實驗步驟要點：為了避免凝膠或膜的蛋白質污染，進行以下操作時需戴手套。1.凝膠電泳之后，立即將凝膠轉移到一個塑料容器
N－端封閉蛋白質內部序列測定實驗
實驗方法原理 實驗材料 蛋白質樣品（約 200 mol）試劑、試劑盒 1％乙酸溶液（含麗春紅 S 染料）1％ 乙酸0.2 mol／L NaOH0.1 mol／L 乙酸溶液(含PVP-40) 消化緩沖液 1 mg／ml 胰蛋白酶層析溶液 A 層析溶液 B儀器、耗材 0.22 μm 硝酸纖維素膜酸洗過的
N－端封閉蛋白質內部序列測定實驗
實驗材料蛋白質樣品（約 200 mol） 試劑、試劑盒1％乙酸溶液（含麗春紅 S 染料）1％ 乙酸0.2 mol／L NaOH0.1 mol／L 乙酸溶液(含PVP-40)消化緩沖液1 mg／ml 胰蛋白酶層析溶液 A層析溶液 B儀器、耗材0.22 μm 硝酸纖維素膜酸洗過的玻璃／Petri 培養皿
N－端封閉蛋白質內部序列測定實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 蛋白質樣品（約 200 mol） ?
常見5種蛋白質中氨基酸的分析實驗
在生命科學的基礎研究中，分離、提純蛋白質是重要而繁鎖的工作。生物體中各種蛋白質的氨基酸組成（或構筑）不盡相同。鑒定純蛋白的最基本方法之一是測定其氨基酸的組分及含量。幾年來，我們對一些蛋白質樣品（達電泳純）進行氨基酸分析，為鑒定蛋白質的結構與純度提供了一項指標。有些蛋白質是國內首次提取或報道。現將
氨基酸序列測定實驗
實驗方法原理 實驗材料 分離膠和積層膠溶液還原型谷胱甘肽干粉試劑、試劑盒 4 × 凝膠緩沖液10 × 下槽緩沖液10 × 上槽緩沖液甲醇轉移緩沖液0.1%（V／V）考馬斯亮藍的 50％甲醇溶液10％（V／V）乙酸的 50％甲醇溶液儀器、耗材 微量注射器或凝膠加樣吸頭PVDF 膜小型電轉裝置自動蛋白質
氨基酸序列測定實驗
基本方案 測定通過 SDS-PAGE 轉移到 PVDF 膜上樣品的氨基酸序列 輔助方案 準備SDS-PAGE蛋白質樣品 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理
蛋白質序列分析和結構預測實驗
實驗步驟 1. ?人脂聯素蛋白質序列的檢索（1）調用Internet瀏覽器并在其地址欄輸入Entrez網址（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Entrez）；（2）在Search后的選擇欄中選擇protein；（3）在輸入欄輸入homo sapiens adiponectin；
蛋白質序列分析和結構預測實驗
蛋白質序列分析和結構預測實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗步驟 1. ?人脂聯素蛋白質序列的檢索（1）調用Internet瀏覽器并在其
蛋白質序列分析和結構預測實驗
實驗步驟1. ?人脂聯素蛋白質序列的檢索（1）調用Internet瀏覽器并在其地址欄輸入Entrez網址（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Entrez）；（2）在Search后的選擇欄中選擇protein；（3）在輸入欄輸入homo sapiens adiponectin；（
PK120－的純化及肽段氨基酸序列分析實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 PK-120
PK120－的純化及肽段氨基酸序列分析實驗
實驗材料PK-120試劑、試劑盒Q-Sepharose 樹脂S-Sepharose 樹脂Hudroxyapatite 羥基磷灰石Sephacryl S－200 凝膠賴氨酸內切酶乙腈三氯醋酸儀器、耗材Applied Biosystems model 477A 氣相蛋白質測定儀Applied Biosy
PK120－的純化及肽段氨基酸序列分析實驗
實驗方法原理 實驗材料 PK-120試劑、試劑盒 Q-Sepharose 樹脂S-Sepharose 樹脂Hudroxyapatite 羥基磷灰石Sephacryl S－200 凝膠賴氨酸內切酶乙腈三氯醋酸儀器、耗材 Applied Biosystems model 477A 氣相蛋白質測定儀A
氨基酸序列測定實驗——輔助方案
實驗材料蛋白質樣品試劑、試劑盒1 mol／L NaHCO3 （可選）100％ 冰冷乙醇(不含變性劑 USP 級)樣品緩沖液 0.1％ （V／V）焦寧 Y 染料儀器、耗材超濾濃縮器／Speedvac蒸發器拉細的巴斯德吸管／凝膠加樣吸頭1.5 ml 微量離心管離心機實驗步驟1. 必要時，用1 mol/L
核酸序列分析實驗
實驗方法原理針對核酸序列的分析就是在核酸序列中尋找基因，找出基因的位置和功能位點的位置，以及標記已知的序列模式等過程。在此過程中，確認一段 DNA 序列是一個基因需要有多個證據的支持。一般而言，在重復片段頻繁出現的區域里，基因編碼區和調控區不太可能出現；如果某段 DNA 片段的假想產物與某個已知的蛋
多肽合成與修飾技術
實驗技術：多肽 合成是一個固相合成順序一般從C端（羧基端）向 N端（氨基端）合成。過去的多肽合成是在溶液中進行的稱為液相合成法。從1963年Merrifield發展成功了固相多肽合成方法以來，經過不斷的改進 和完善，到今天固相法已成為多肽和蛋白質合成中的一個常用技術，表現出了經典液相合成
氨基酸序列測定實驗——基本方案
測定通過 SDS-PAGE 轉移到 PVDF 膜上樣品的氨基酸序列實驗材料分離膠和積層膠溶液還原型谷胱甘肽干粉試劑、試劑盒4 × 凝膠緩沖液10 × 下槽緩沖液10 × 上槽緩沖液甲醇轉移緩沖液0.1%（V／V）考馬斯亮藍的 50％甲醇溶液10％（V／V）乙酸的 50％甲醇溶液儀器、耗材微量注射器或
分子進化的起源
在漫長的進化過程中生物的 DNA經歷了各種各樣的變化。包括基因突變、基因重組、染色體易位等。堿基置換突變常導致蛋白質中一個氨基酸的改變。例如正常血紅蛋白第 6位的谷氨酸改變為纈氨酸便成為鐮形細胞貧血癥的血紅蛋白 HbS，為賴氨酸替代則成為HbC，前者的堿基是從GAA（谷氨酸）→GUA（纈氨酸），后者
蛋白質序列分析及結構預測策略包括哪些步驟
序列分析通常就是指同源性分析、保守位點分析，motif分析和功能預測等，結構預測通常又包括二級結構三級結構甚至四級結構，二級結構目前預測還是比較準確的，三級結構最簡單的可以直接將蛋白序列提交swissmodel在線進行預測，也可以采用一些其他軟件，如modeller和一些商業軟件，主要原理是同源
電泳分離的蛋白質肽譜和序列分析實驗
實驗材料 凍干的純化蛋白樣品試劑、試劑盒 甲酸氫溴酸過氧化氫NaOH 固體儀器、耗材 旋轉蒸發器小試管實驗步驟 1.加入 100ul 過氧化氫到 900ul 甲酸中，在室溫下放置讓，將反應產生過甲酸 (HCOOOH)。2.在冰上冷凍過甲酸至 0°C。3.在預冷的小試管中，將蛋白質溶解于 50ul 過
電泳分離的蛋白質肽譜和序列分析實驗
方案1 蛋白質的過甲酸氧化實驗 方案2 蛋白質還原和S-羧甲基化：大規模方法 方案3 蛋白質還原和S-羧甲基化：微量方法 方案4 用Ellman 試劑測定自由巰基和二硫鍵實驗 方案5 蛋白質的胰酶消化實驗 方案6 用溴化氰切割 M
核酸和蛋白質序列分析1
在獲得一個基因序列后，需要對其進行生物信息學分析，從中盡量發掘信息，從而指導進一步的實驗研究。通過染色體定位分析、內含子／外顯子分析、ORF分析、表達譜分析等，能夠闡明基因的基本信息。通過啟動子預測、CpG島分析和轉錄因子分析等，識別調控區的順式作用元件，可以為基因的調控研究提供基礎。通過蛋白質基本
蛋白質序列分析和結構預測
【實驗目的】 1、掌握蛋白質序列檢索的操作方法； 2、熟悉蛋白質基本性質分析； 3、熟悉基于序列同源性分析的蛋白質功能預測，了解基于motif、結構位點、結構功能域數據庫的蛋白質功能預測； 4、了解蛋白質結構預測。【實驗內容】 1、使用Entrez或SRS信息查詢系統檢索人脂聯素（ad
蛋白質序列分析和結構預測
【實驗目的】1、掌握蛋白質序列檢索的操作方法；2、熟悉蛋白質基本性質分析；3、熟悉基于序列同源性分析的蛋白質功能預測，了解基于motif、 結構位點、結構功能域數據庫的蛋白質功能預測；4、了解蛋白質結構預測。【實驗內容】1、使用Entrez或SRS信息查詢系統檢索人脂聯素 (adiponectin)