利用寡核苷酸延伸法進行純化DNA片段的放射性標記
隨機引物法：利用寡核苷酸延伸法進行純化DNA片段的放射性標記1. 在一個0.5ml的微量離心管中加入溶于30μl水的模板DNA(25ng)及1μl隨機脫氧核苷酸引物（約125ng）。蓋緊微量離心管，置于沸水浴中2min。2. 將微量離心管移至冰上放置1min，4℃下離心10s使引物與模板的混合物沉降至管底，將微量離心管重新置于冰上。3. 在引物與模板的混合物中加入：5 mmol/L dNTP溶液 1μl5×隨機引物緩沖液 &n......閱讀全文
利用寡核苷酸延伸法進行純化DNA片段的放射性標記
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隨機引物法（利用隨機寡核苷酸延伸進行DNA的放射標記）
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 此法系可用于從低熔點瓊脂糖凝膠中回收 DNA 的放射性標記 ( Feinberg 和 Vogelstein 1983，1984)。 實驗材料
用隨機寡核苷酸延伸法進行扣除cDNA探針的放射性標記
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 此方案中 cDNA 的合成是在 4 種飽和濃度的 dNTP 及一種痕量的放射性標記的 dNTP 中進行的。扣除雜交后，在大腸桿菌 DNA 聚合酶Ⅰ的 Klenow 片段作用下，富集的單鏈 cDNA 通過隨機寡核苷酸引物延伸的
用隨機寡核苷酸延伸法進行扣除cDNA探針的放射性標記
實驗方法原理 此方案中 cDNA 的合成是在 4 種飽和濃度的 dNTP 及一種痕量的放射性標記的 dNTP 中進行的。扣除雜交后，在大腸桿菌 DNA 聚合酶Ⅰ的 Klenow 片段作用下，富集的單鏈 cDNA 通過隨機寡核苷酸引物延伸的二次合成反應，標記成高比活性的探針。由 于第一輪反應中
用隨機寡核苷酸延伸法進行扣除cDNA探針的放射性標記
此方案中 cDNA 的合成是在 4 種飽和濃度的 dNTP 及一種痕量的放射性標記的 dNTP 中進行的。扣除雜交后，在大腸桿菌 DNA 聚合酶Ⅰ的 Klenow 片段作用下，富集的單鏈 cDNA 通過隨機寡核苷酸引物延伸的二次合成反應，標記成高比活性的探針。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培
微量柱法純化DNA片段
實驗概要目的DNA片段的回收技術是重組DNA中的關鍵技術，回收是指從電泳介質中純化出目的片斷。目前待回收的片斷主要有酶切片斷和各種PCR片斷；回收的介質主要有瓊脂糖和PAGE；回收的方法主要有樹脂回收、微量柱回收、玻璃奶回收、液氮凍凍融回收及透析袋大量回收等，下面分別介紹樹脂、微量柱及液氮凍凍融回收
CPB沉淀法純化放射性標記的寡核苷酸實驗
本方案介紹用陽離子去污劑——十六燒基溴化吡啶（cetylpyridinium bromide,CPB) 定量差異沉淀分離放射性標記的寡核苷酸與未摻入的放射性標記物。此方法最初是用于回收磷酸緩沖液從羥磷灰石柱洗脫的 DNA(Geek and Nasz 1983), 也可用于沉淀放射性標記核酸包括寡核苷
乙醇沉淀法純化放射性標記的寡核苷酸實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 乙酸銨 乙醇 TE 放射性標記的寡核苷酸 純化的原料 實驗步驟
CPB沉淀法純化放射性標記的寡核苷酸實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 十六烷基溴化吡啶 EDTA-Tris EDTA-Tris-DNA 溶液 乙醇-乙酸鈉溶液 乙醇 乙酸鈉 TE(
乙醇沉淀法純化放射性標記的寡核苷酸實驗
試劑、試劑盒 乙酸銨乙醇TE放射性標記的寡核苷酸純化的原料實驗步驟 材料溶液和緩沖液稀釋貯存液至適當濃度。乙酸銨（1mol/L)乙醇TE(pH7.6)核酸和寡核苷酸放射性標記的寡核苷酸純化的原料是方案 2(步驟 3 或步驟 5) 的反應混合液，T4 噬菌體多核苷酸激酶巳在 68°C 加熱后滅活。方法
乙醇沉淀法純化放射性標記的寡核苷酸實驗
如果放射性標記的寡核苷酸只是用作雜交探針的話，一般不必完全除去未摻入的放射性標記物。然而，為了使本底降至最低，應該將未摻入的大部分放射性標記物與放射性標記的寡核苷酸分離。如果寡核苷酸長度超過 18 個核苷酸（本方案)，則絕大部分未反應的放射性前體物質可通過乙醇分級沉淀除去。本實驗來源于分子克隆實驗指
DNA片段回收與純化
????質粒、噬菌體等經酶切，電泳；PCR產物經電泳后，常常需要對一些DNA電泳片段進行回收和純化，用于亞克隆、探針標記等。DNA回收和純化常用方法有壓碎法、低融點瓊脂糖法、凍融法等，也有現成的試劑盒供應。一、凍融法1.??紫外燈下仔細切下含待回收DNA的膠條，將切下的膠條（小于0.6g）搗碎，置于
DNA小片段的純化回收
DNA 電泳小于100bp的片斷通常在電泳時就比較難觀察分辨，需要用分辨率很高的瓊脂糖或者丙烯酰胺凝膠。比如Cambrex的NuSieve 3:1或者GTG，或者是大名鼎鼎的MetaPhor瓊脂糖。所以實際上對于小片斷，可以分為兩種情況：一個是真的要回收電泳中特別小的片斷，這種情況我們前面有提到，比
大小排阻層析法純化放射性標記的寡核苷酸實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 氯仿 EDTA 乙醇 酚：氯仿 乙酸鈉 TE Tris-Cl Tris-SDS
大小排阻層析法純化放射性標記的寡核苷酸實驗
放射性標記的寡核苷酸用于酶促反應如引物延伸反應時，需要完全除去未摻入的放射性標記物。本方案介紹的是利用大小排阻層析時寡核苷酸與單核苷酸移動速率差異，分離放射性標記的寡核苷酸與未摻入的放射性標記物的方法。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）上冊，作者：黃培堂。試劑、試劑盒氯仿EDTA乙醇酚：氯仿乙酸
大小排阻層析法純化放射性標記的寡核苷酸實驗
試劑、試劑盒 氯仿EDTA乙醇酚：氯仿乙酸鈉TETris-ClTris-SDS 層析緩沖液放射性標記的寡核苷酸純化的原料儀器、耗材 凝膠過濾樹脂破璃棉巴斯德吸管實驗步驟 材料溶液和緩沖液稀釋貯存液至適當濃度。氯仿任選，見步驟 7。EDTA(0.5mol/L,pH8.0)乙醇酚：氯仿任選，見步驟 7。
關于Southern雜交的探針標記簡介
用于Southern印跡雜交的探針可以是純化的DNA片段或寡核苷酸片段。探針可以用放射性物質標記或用地高辛標記，放射性標記靈敏度高，效果好；地高辛標記沒有半衰期，安全性好。人工合成的短寡核苷酸可以用T4多聚核苷酸激酶進行末端標記。探針標記的方法有隨機引物法、切口平移法和末端標記法。
DNA序列測定技術（Sanger雙脫氧鏈終止法與Maxam－Gilbert...4
序列測定的技術和策略Sanger雙脫氧鏈終止法Maxam－Gilbert DNA 化學降解法測序策略目前應用的兩種快速序列測定技術是Sanger等（1977）提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化學降解法。雖然其原理大相徑庭，但這兩種方法都是同樣生成互相獨立的若干組帶放射性標記的
用大腸桿菌－Klenow－片段標記合成的寡核苷酸實驗
通常利用 T4 噬菌體多核苷酸激酶催化的磷酸化反應進行寡核苷酸的標記。但有時需要標記比活度更高的放射性標記的探針，最理想的情況下，磷酸化反應中每一個寡核苷酸分子上有一個?32P 原子摻人。而用大腸桿菌 DNA 聚合酶 IKlenow 片段合成與寡核苷酸互補的一條 DNA 鏈，可獲得更高比活度的探針。
如何進行DNA純化
檢測：用足跡法，又稱為足印法（footprinting）是一種用來測定DNA-蛋白質專一性結合的方法。用于檢測與特定蛋白質結合 的DNA序列的部位,可展示蛋白質因子同特定DNA片段之間的結合區域。其原理為：DNA和蛋白質結合以后便不會被DNAase分解，在測序時便出現空白區(即蛋白質結合區)，從而了
隨機引物法（在融化瓊脂糖存在下利用隨機寡核苷酸延...
隨機引物法（在融化瓊脂糖存在下利用隨機寡核苷酸延伸進行DNA的放射標記）實驗方法原理 此法系可用于從低熔點瓊脂糖凝膠中回收 DNA 的放射性標記 ( Feinberg 和 Vogelstein 1983，1984)。實驗材料 大腸桿菌 DNA 聚合酶Ⅰ Klenow 片段模板 DNA試劑、試劑盒 醋
用引物延伸法進行－RNA－的分析
引物延伸法主要用于 mRNA5' 末端作圖。poly (A)?+?RNA 先與過量 5' 末端標記的且與靶 RNA 互補的單鏈寡核苷酸引物雜交，然后用反轉錄酶延伸這個引物。產生的 cDNA 與 RNA 模板互補且長度與引物 5' 末端和 RNA 5' 末端之間的距離相
用引物延伸法進行－RNA－的分析
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 引物延伸法主要用于 mRNA5' 末端作圖。poly (A) + RNA 先與過量 5' 末端標記的且與靶 RNA 互補的單鏈寡核苷酸引物雜交，然后用反轉錄酶延伸這個引物。產生的 cDNA 與 RNA 模板互補且
用引物延伸法進行－RNA－的分析
實驗方法原理?引物延伸法主要用于 mRNA5' 末端作圖。poly (A) + RNA 先與過量 5' 末端標記的且與靶 RNA 互補的單鏈寡核苷酸引物雜交，然后用反轉錄酶延伸這個引物。產生的 cDNA 與 RNA 模板互補且長度與引物 5' 末端和 RNA 5'
用SepPak－C18柱層析法純化放射性標記的寡核苷酸實驗
本方案介紹的是利用寡核苷酸對于硅膠反相親和的特性，將放射性標記的寡核苷酸與未摻入的放射性標記物分離的方法，本方案的方法只可用于純化 5'端放射性標記或非標記的含磷酸基團的寡核苷酸，而方案 1 所介紹的方法多用于 5'末端為游離羥基的寡核苷酸。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）上冊
用SepPak－C18柱層析法純化放射性標記的寡核苷酸實驗
試劑、試劑盒 乙腈碳酸氫銨TE 溶液放射性標記寡核苷酸儀器、耗材 離心干燥機微量離心管放于管架或收集器Sep-Pak 經典層析柱注射器實驗步驟 材料溶液和緩沖液稀釋貯存液至適當濃度。乙腈（5%、30% 和 100%)毎個 Sep-Pak C18 柱用 10 ml 髙效液相（HPLC) 級乙腈（100
用SepPak－C18柱層析法純化放射性標記的寡核苷酸實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 乙腈 碳酸氫銨 TE 溶液 放射性標記寡核苷酸 儀器、耗材 離心干
凍融法回收DNA片段
凍融法回收DNA片段可用于：（1）獲取純化的DNA片段；（2）回收PCR產物。實驗方法原理凍融法是指采用反復冷凍與融化時由于細胞中形成了冰晶及剩余液體中鹽濃度的增高可以使細胞破裂。這種方法簡單方便，但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質不宜采用此法。?實驗材料DNA膠條試劑、試劑盒Tris-HCl飽和酚
凍融法回收DNA片段
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 凍融法是指采用反復冷凍與融化時由于細胞中形成了冰晶及剩余液體中鹽濃度的增高可以使細胞破裂。這種方法簡單方便，但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質不宜采用此法。? 實驗材料
從M13噬菌體模板合成固定長度的單鏈DNA探針
實驗材料 大腸桿菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段限制性內切核酸酶模板 DNA寡核苷酸引物試劑、試劑盒 乙酸銨DTTEDTA乙醇NaCl酚氯仿TBE 電泳緩沖液Tris-ClKlenow 基礎緩沖液dNTP 溶液儀器、耗材 變性聚丙烯酰胺凝膠或堿性瓊脂糖凝膠黏性貼片或磷光黏性貼片Sephad