Southern雜交技術的方法和步驟
Southern雜交可用來檢測經限制性內切酶切割后的DNA片段中是否存在與探針同源的序列,它包括下列步驟:(1) 酶切DNA, 凝膠電泳分離各酶切片段,然后使DNA原位變性。(2) 將DNA片段轉移到固體支持物(硝酸纖維素濾膜或尼龍膜)上。(3) 預雜交濾膜,掩蓋濾膜上非特異性位點。(4) 讓探針與同源DNA片段雜交,然后漂洗除去非特異性結合的探針。(5) 通過顯影檢查目的DNA所在的位置。Southern雜交能否檢出雜交信號取決于很多因素,包括目的DNA在總DNA中所占的比例、探針的大小和比活性、轉移到濾膜上的DNA量以及探針與目的DNA間的配對情況等。在最佳條件下,放射自顯影曝光數天后, Southern雜交能很靈敏地檢測出低于0.1pg與32 P標記的高比活性探針的(>109 cpm/μg)互補DNA。如果將10μg基因組DNA轉移到濾膜上，并與長度為幾百個核苷酸的探針雜交,曝光過夜,則可檢測出哺乳動物基因......閱讀全文
Southern雜交技術的方法和步驟
Southern雜交可用來檢測經限制性內切酶切割后的DNA片段中是否存在與探針同源的序列,它包括下列步驟:(1) 酶切DNA, 凝膠電泳分離各酶切片段,然后使DNA原位變性。(2) 將DNA片段轉移到固體支持物(硝酸纖維素濾膜或尼龍膜)上。(3)?預雜交濾膜,掩蓋濾膜上非特異性位點。(4) 讓探針與
分子雜交技術Southern雜交的操作步驟
(1) 約50μl體積中酶切10pg-10μg的DNA, 然后在瓊脂糖凝膠中電泳12-24小時(包括DNA分子量標準物)。 (2) 500ml水中加入25μl 10mg/ml溴化乙錠,將凝膠放置其中染色30分鐘, 然后照相。 (3) 依次用下列溶液處理凝膠,并輕微搖動: 500ml 0.2m
Southern雜交步驟
Southern雜交可用來檢測經限制性內切酶切割后的DNA片段中是否存在與探針同源的序列,它包括下列步驟:(1) 酶切DNA, 凝膠電泳分離各酶切片段,然后使DNA原位變性。(2) 將DNA片段轉移到固體支持物(硝酸纖維素濾膜或尼龍膜)上。(3)?預雜交濾膜,掩蓋濾膜上非特異性位點。(4) 讓探針與
southern印跡雜交的方法步驟
以哺乳動物基因組DNA為例，介紹Southern印跡雜交的基本步驟。一、 待測核酸樣品的制備（一）制備待測DNA基因組DNA是從動物組織（或）細胞制備。1.采用適當的化學試劑裂解細胞，或者用組織勻漿器研磨破碎組織中的細胞；2.用蛋白酶和RNA酶消化大部分蛋白質和RNA；3.用有機試劑（酚/氯仿）抽提
Southern雜交技術
?SOUTHERN BLOT1. Run the gel as normal. Often for genomic southerns it is desirable to run long gels (18cm) over 4-6hrs.2. Photograph the gel with a r
關于Southern雜交的步驟介紹
1.將標記的DNA探針置沸水浴10min，迅速置冰上冷卻1-2min，使DNA變性。 2.從水浴中取出含有濾膜和預雜交液的塑料袋，剪開一角，將變性的DNA探針加到預雜交液中。 3.盡可能除取袋中的空氣，封住袋口，滯留在袋中的氣泡要盡可能地少，為避免同位素污染水浴，將封好的雜交袋再封入另一個未
Southern－雜交技術1
Southern技術是指以Southern名字命名的DNA轉移雜交技術。它可用于基因組特定DNA序列的定位，可以測定相關片段的同源性、可以從c庫、基因組文庫中篩選完整基因等。用一種或多種限制性內切酶對基因組DNA加以切割，通過瓊脂糖凝膠電泳分離酶切片段，隨后，使DNA在原位變性，并從凝膠轉移至固相膜
Southern－雜交技術2
三：操作(一)轉膜1電泳2切膠 在紫外下，切取凝膠有條帶部分3脫嘌啉0.25NHCL浸泡凝膠10分鐘，蒸餾水洗膠（大于15kb的DNA片段轉移時做此步驟）4變性，變性液（0.5MNaOH、1.5MNaCL）浸泡凝膠2次，每次15分鐘，蒸餾水洗膠5中和,中和液（0.5Mtris-HCL,pH7.0、3
Northern雜交技術的方法和步驟
Northern雜交與Southern雜交很相似。主要區別是被檢測對象為RNA,其電泳在變性條件下進行,以去除RNA中的二級結構,保證RNA完全按分子大小分離。變性電泳主要有3種:乙二醛變性電泳、甲醛變性電泳和羥甲基汞變性電泳。電泳后的瓊脂糖凝膠用與Southern轉移相同的方法將RNA轉移到硝酸纖
分子雜交技術Southern雜交的相關介紹
Southern雜交可用來檢測經限制性內切酶切割后的DNA片段中是否存在與探針同源的序列,它包括下列步驟: (1) 酶切DNA, 凝膠電泳分離各酶切片段,然后使DNA原位變性。 (2) 將DNA片段轉移到固體支持物(硝酸纖維素濾膜或尼龍膜)上。 (3)預雜交濾膜,掩蓋濾膜上非特異性位點。
斑點雜交技術的方法和步驟
斑點雜交是指將DNA或RNA樣品直接點在硝酸纖維素濾膜上,然后與核酸探針分子雜交，以顯示樣品中是否存在特異的DNA或RNA。同一種樣品經不同倍數的稀釋,還可以得到半定量的結果。所以它是一種簡便、快速、經濟的分析DNA或RNA的方法,在基因分析和基因診斷中經常用到,是研究基因表達的有力工具。但由于目的
northern,southern,western雜交的具體步驟
所用于分析的對象不同。 Northern雜交用于分析RNA； Southern雜交用于分析DNA； Western雜交用于分析蛋白質。大致過程如下： (1) 酶切DNA, 凝膠電泳分離各酶
Southern－Blot雜交的原理、步驟及應用
原理Southern印跡雜交技術是分子生物學領域中最常用的具體方法之一。其基本原理是：具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下，可按堿基互補的原 則形成雙鏈，此雜交過程是高度特異的。由于核酸分子的高度特異性及檢測方 法的靈敏性，綜合凝膠電泳和 核酸內切限制酶分析的結果，便可繪制出DNA分子的限制圖
Southern印跡技術原理和操作步驟
實驗原理:Southern印跡是將DNA片斷從電泳凝膠上直接轉移至膜支持物（如硝酸纖維素膜、尼龍膜）上，使DNA片斷固定的技術。先將DNA經限制性內切酶消化成一系列片段，進行瓊脂糖凝膠電泳，各片段因分子量不同而彼此分開，然后經堿處理凝膠，使DNA的片段被變性、中和并通過毛細作用在高鹽緩沖液中在原位將
小麥Southern雜交分析方法
預雜交液的制備：根據要雜交的膜的數量配制預雜交液，每25 ml預雜交液（1~2張膜）的成分組成如下： H2O 15 ml 20×SSPE 6
Southern雜交
?? Southern雜交可用來檢測經限制性內切酶切割后的DNA片段中是否存在與探針同源的序列,它包括下列步驟: (1) 酶切DNA, 凝膠電泳分離各酶切片段,然后使DNA原位變性。? (2) 將DNA片段轉移到固體支持物(硝酸纖維素濾膜或尼龍膜)上。? (3) 預雜交濾膜,掩蓋濾膜上非特異性
Southern雜交
實驗概要本實驗介紹了Southern雜交的基本流程。主要試劑細菌基因組DNA抽提試劑盒，限制性內切酶，變性溶液，中和溶液，10 X SSC，雜交緩沖液(200mM磷酸鈉緩沖液，PH7.2，1 mM EDTA，50%甲酞胺，1% BSA，7% SDS)，隨機引物標記試劑盒，洗脫緩沖液(2 X SSC，
基因組DNA－Southern雜交操作步驟
1）基因組DNA Southern印跡的制備 預備 1．用適當的限制性內切酶消化基因組DNA樣品（10μg）。 2．進行瓊脂糖凝膠電泳。一般用0.7～1.0％的瓊脂糖凝膠分離基因組DNA，它在1～15kb的范圍內有較好的分辨率，可選用TBE或TAE緩沖液。瓊脂糖凝膠電泳需在1V/cm的電
Southern－雜交操作步驟及注意事項
Southern 雜交是分子生物學的經典實驗方法。其基本原理是將待檢測的DNA樣品固定在固相載體上，與標記的核酸探針進行雜交，在與探針有同源序列的固相DNA的位置上顯示出雜交信號。通過Southern雜交可以判斷被檢測的DNA樣品中是否有與探針同源的片段以及該片段的長度。該項技術廣泛被應用在遺傳病
菌落原位雜交技術的方法和步驟
對分散在若干個瓊脂平板上的少數菌落（100-200）進行克隆篩選時，可采用本方法。將這些菌落歸并到一個瓊脂主平板以及已置于第二個瓊脂平板表面的一張硝酸纖維素濾膜上。經培養一段時間后，對菌落進行原位裂解。主平板應貯存于4℃直至得到篩選結果。1、材料：待檢測的細菌平皿，已標記好的探針，硝酸纖維素濾膜等。
Southern印跡雜交實驗原理和方法2
（一） 細管虹吸印跡法此法是利用濃鹽酸轉移緩沖液的推動作用將凝膠中的DNA轉移到固相支持物上，轉移方式見圖10－1：容器中的轉移緩沖液含有高濃度的NaCl和檸檬酸鈉，上層吸水紙的虹吸作用使緩沖液通過濾紙橋、濾紙、凝膠、硝酸纖維素膜或尼龍膜向上運動，同時帶動凝膠中的DNA片段垂直向上運動而滯留在膜上。
Southern印跡雜交實驗原理和方法1
實驗原理核酸分子雜交技術是分子生物學領域中最常用的具體方法之一。其基本原理是：具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下，可按堿基互補的原則形成雙鏈，此雜交過程是高度特異的。由于核酸分子的高度特異性及檢測方法的靈敏性，綜合凝膠電泳和核酸內切限制酶分析的結果，便可繪制出DNA分子的限制圖譜。但為了進一
Southern印跡雜交實驗原理和方法3
真空轉移法的最大優點是迅速，可在轉膜的同時進行DNA變性與中和整個過程約需30～60分鐘。但在操作中應注意兩個問題，一是真空壓力不能太大，若壓力過大，凝膠被壓縮，轉移效率會降低；二是真空轉移液要密封嚴，防止漏氣影響壓力的產生。下表列出了不同的印跡方法。表10－2 不同印跡方法的比較表五、探針標記用于
Southern雜交分析原理和操作
【原理】Southern雜交是分子生物學的經典實驗方法。其基本原理是將待檢測的DNA樣品固定在固相載體上,與標記的核酸探針進行雜交,在與探針有同源序列的固相DNA的位置上顯示出雜交信號。通過Southern雜交可以判斷被檢測的DNA樣品中是否有與探針同源的片段以及該片段的長度。一．基因組DNA的限制
核酸雜交技術(Northern－Blot、Southern－Blot和探針標記）
（一）Southern Blot原理：將待檢測的DNA分子用/不用限制性內切酶消化后，通過瓊脂糖凝膠電泳進行分離，繼而將其變性并按其在凝膠中的位置轉移到硝酸纖維素薄膜或尼龍膜上，固定后再與同位素或其它標記物標記的DNA或RNA探針進行反應。如果待檢物中含有與探針互補的序列，則二者通過堿基互補的原理進
Northern雜交、Southern雜交和Western雜交有什么區別
區別：研究的對象不同。southern主要的對象是DNA，northern研究的對象是RNA，而western研究的對象為蛋白質。1、Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段
Northern雜交、Southern雜交和Western雜交有什么區別
區別：研究的對象不同。southern主要的對象是DNA，northern研究的對象是RNA，而western研究的對象為蛋白質。1、Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段
Northern雜交、Southern雜交和Western雜交有什么區別
區別：研究的對象不同。southern主要的對象是DNA，northern研究的對象是RNA，而western研究的對象為蛋白質。1、Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段
Southern－雜交鑒定
1）??取10ul待測DNA，于一定濃度的瓊脂糖凝膠上進行電泳。(20mL,1.0%凝膠,)2) 凝膠用溴化乙錠染色，切掉凝膠四周多余部分，并在凝膠的一角作一記號, 拍照記錄電泳結果(拍照時, 凝膠旁放一尺子)。3) 雜交用膠的制備 (做以下步驟兩組合一)A．??將凝膠浸沒入30mL 0.25mol
Southern雜交電泳凝膠預處理的基本步驟
1. 如果靶序列>5kb，則需進行脫嘌呤處理。 (1) 把凝膠浸在0.25mol/L HCl中，室溫輕輕晃動，直到溴酚藍從藍變黃。 注意：處理人類基因組DNA≤10分鐘；處理植物基因組DNA≤20分鐘。 (2) 把凝膠浸在滅菌雙蒸水中 2. 如果靶序列